Développement d’un modèle d’épiderme reconstruit murin : caractérisation histologique et réponse aux cytokines proinflammatoires

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• 作者：Mathilde Pohin¹ ; Carolina Veaute² ; Julien Garnier³ ; Christine Barrault³ ; Laurent Cronier⁴ ; Laure Favot¹ ; Franç ; ois-Xavier Bernard³ ; Jean-Claude Lecron¹ ; ⁵ ; Franck Morel¹ ; Jean-Franç ; ois Jé ; gou¹ ;
• 关键词：Cytokine ; É ; pidermes reconstruits murins ; Ké ; ratinocytes
• 刊名：Annales de Dermatologie et de Vénéréologie
• 出版年：2016
• 出版时间：December 2016
• 年：2016
• 卷：143
• 期：12_supp_S
• 页码：S436-S437
• 全文大小：57 K
• 卷排序：143

文摘

Les cultures de kératinocytes en monocouche sont couramment utilisées dans les études in vitro, mais celles-ci ne reproduisent pas fidèlement l’architecture de l’épiderme et les caractéristiques physiologiques des différents états de différenciation cellulaire. Dans cette étude, nous décrivons un protocole simple et rapide pour la génération d’épidermes reconstruits murins (RME) à partir de kératinocytes primaires de souriceaux. Après avoir caractérisé les différentes étapes de leur différenciation, nous analysons leur réponse à la stimulation par des cytokines proinflammatoires.Matériel et méthodesLes RME sont réalisés à partir de kératinocytes primaires issus de peaux de souriceaux nouveau-nés cultivés dans des inserts en polycarbonate dans un milieu d’ensemencement. Dès l’obtention d’une monocouche cellulaire, les inserts sont passés à l’interface air-liquide au contact d’un milieu de différenciation. La caractérisation des RME est effectuée par histologie et par immunohistofluorescence pour la détection de marqueurs de différenciation incluant les kératines 14, 6, 10, la loricrine, la filaggrine, l’E-Cadhérine et des connexines. Leur perméabilité est éprouvée par des tests de diffusion de la sonde fluorescente Lucifer Yellow. Enfin, la réponse des RME aux cytokines IL-17A, TNFα, IL-22, IL-1α et oncostatine M est évaluée par RT-qPCR par la mesure de l’expression de marqueurs de différenciation, de peptides antimicrobiens et de chimiokines.RésultatsNotre protocole permet d’obtenir des RME qui reproduisent les caractéristiques morphologiques et phénotypiques d’un épiderme de souris en seulement 5 jours après leur passage à l’interface air-liquide comme l’atteste l’expression des marqueurs de différenciation conforme à celle d’un épiderme natif. Les RME acquièrent également leur fonction de barrière et sont imperméables au passage de la Lucifer Yellow. Enfin, suite à leur stimulation par des cytokines proinflammatoires, les RME répondent de manière similaire à un épiderme in vivo par une diminution d’expression de la kératine 10, de l’involucrine et de la filaggrine et une augmentation de l’expression de médiateurs de l’inflammation tels que la chimiokine CXCL-3 et les peptides antimicrobiens S100A9 et β-défensine-3.DiscussionCe nouveau protocole permet donc de réaliser rapidement et facilement des RME reproduisant fidèlement l’architecture et les caractéristiques physiologiques d’un épiderme, y compris leur réponse dans un contexte inflammatoire.ConclusionCe modèle de RME permet d’étudier les mécanismes physiologiques de la peau et ouvre la perspective de réaliser des RME à partir de kératinocytes issus de souris génétiquement modifiées.