广西荔枝炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的研究鉴定及荔枝常温涂膜保鲜的研究
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摘要
荔枝是驰名中外的亚热带水果，贮藏困难。本研究从病原菌的侵染致病作用这个关键环节出发，并辅以纳米ZnO等新兴抗菌材料，对荔枝进行常温保鲜的研究。
首先从病变的妃子笑荔枝中分离并纯化了一株致病菌，以真菌的ITS通用引物从其总DNA中扩增到含576bp的rDNA的内转录间隔区片段，成功克隆到E．coil(JM109)，测序后进行同源性比较，结果与国外(德国)报道的Colletotrichum gloeosporioides同源性高达99.31％。通过对其生物学特性的研究表明，该菌生长的最适温度25～30℃，最适宜的pH值为5.5～8.5。能在多种培养基上生长并表现出略有不同的外观特征，其中在富含植物成分的PDA培养基上生长最为旺盛。抑菌剂中施保克对其抑制作用最强，脱氢乙酸也能抑制该菌的生长，大蒜汁也有抑制作用。
通过对新型成膜剂魔芋淀粉的改性研究证明，山梨酸和柠檬酸改性的效果最好，可使其膨胀率和耐磨性大大增强。利用改性魔芋粉及其它成膜剂，使用高压均质方法可很好地分散浓度为2％的纳米ZnO，分散效果大大优于传统的超声波法。
荔枝经过涂膜液浸果涂膜，并辅以塑料袋包装，可以降低失重率，
提高防揭效率。经过单药剂和复合多药剂的实验证明，纳米材料作为单
独因子在荔枝保鲜中效果不明显，和施保克等真菌的强抑制剂复配使用
时，可以提高荔枝的防揭变效率;施保克、脱氢乙酸和曲酸等的存在，
有利于果色的保持，而加入柠檬酸则会加速褐变。
Litchi, as a kind of famous fruit in the subtropical zone, is well-known ail over the world for its special color and delicious flavor; however, it is very difficult to preserve this fruit under normal temperature. In this thesis, preservation of litchi was studied under normal temperature by coating, based on the damage which result in browning of litchi pericarp, induced by pathogen, and the usages of new-type material, such as nano-ZnO, etc.
A pathogenic fungus, was isolated from the damaged fruit of feizixiao and purified; moreover, a 576 bp rDNA (partial) ITS fragment which was obtained by PCR from total DNA of it with a internal transcribed spacer (ITS) universal primers, was cloned into E.coli (JM109). When BLAST search for comparisons of the sequences was used after sequencing, it is very closed to Colletotrichum gloeosporioides from Germany with 99.31% identity. At the same time, the fungus has been characterized biologically, the result was shown that the optimum temperature and pH for its growth was 25-30
℃ and 5.5-8.5, in addition, the fungus can grow but with a little difference in biological aspect on many kinds of media. However, it grew faster on the vegetable-component medium such as PDA than it did on the others.In all the fungicides, Sportak was the most effective suppressor, dehydroacetic acid can
also suppress the fungus, and so did garlic extract.
From the study on refined konyaku starch modification, a new-type coating agents, it could be seen that both sorbic acid and citric acid were the best of all modificative agents in the experimentation because they could enhance the expansivity and the abrasion resistance of konjaku gluccomannan (KGM, 80% of refined konjaku starch). Using KGM modified and other coating agents as major dispersants, and homogenizing the composite hyper-dispersants including nano-ZnO (2%) by High-Pressure-Homogenizer, the effect of dispersedness was very good and much better than that of by ultrasonic traditionally.
When litchi were dipped in coating agents solution and packed in thin plastic bags, the rate of its weight lost was down, while the efficiency of its browning resistance was up. From the experiments with each one of agents individually and compositely, it was illustrated that nano-material was useless when being added into alone but it played a positive role with stronger fungicides such as Sportak together; and that Sportak, dehydroacetic acid and kojic acid, acted a same key roles in keeping-fresh, nevertheless, citric acid always play a negative role .
首先从病变的妃子笑荔枝中分离并纯化了一株致病菌，以真菌的ITS通用引物从其总DNA中扩增到含576bp的rDNA的内转录间隔区片段，成功克隆到E．coil(JM109)，测序后进行同源性比较，结果与国外(德国)报道的Colletotrichum gloeosporioides同源性高达99.31％。通过对其生物学特性的研究表明，该菌生长的最适温度25～30℃，最适宜的pH值为5.5～8.5。能在多种培养基上生长并表现出略有不同的外观特征，其中在富含植物成分的PDA培养基上生长最为旺盛。抑菌剂中施保克对其抑制作用最强，脱氢乙酸也能抑制该菌的生长，大蒜汁也有抑制作用。
通过对新型成膜剂魔芋淀粉的改性研究证明，山梨酸和柠檬酸改性的效果最好，可使其膨胀率和耐磨性大大增强。利用改性魔芋粉及其它成膜剂，使用高压均质方法可很好地分散浓度为2％的纳米ZnO，分散效果大大优于传统的超声波法。
荔枝经过涂膜液浸果涂膜，并辅以塑料袋包装，可以降低失重率，
提高防揭效率。经过单药剂和复合多药剂的实验证明，纳米材料作为单
独因子在荔枝保鲜中效果不明显，和施保克等真菌的强抑制剂复配使用
时，可以提高荔枝的防揭变效率;施保克、脱氢乙酸和曲酸等的存在，
有利于果色的保持，而加入柠檬酸则会加速褐变。
Litchi, as a kind of famous fruit in the subtropical zone, is well-known ail over the world for its special color and delicious flavor; however, it is very difficult to preserve this fruit under normal temperature. In this thesis, preservation of litchi was studied under normal temperature by coating, based on the damage which result in browning of litchi pericarp, induced by pathogen, and the usages of new-type material, such as nano-ZnO, etc.
A pathogenic fungus, was isolated from the damaged fruit of feizixiao and purified; moreover, a 576 bp rDNA (partial) ITS fragment which was obtained by PCR from total DNA of it with a internal transcribed spacer (ITS) universal primers, was cloned into E.coli (JM109). When BLAST search for comparisons of the sequences was used after sequencing, it is very closed to Colletotrichum gloeosporioides from Germany with 99.31% identity. At the same time, the fungus has been characterized biologically, the result was shown that the optimum temperature and pH for its growth was 25-30
℃ and 5.5-8.5, in addition, the fungus can grow but with a little difference in biological aspect on many kinds of media. However, it grew faster on the vegetable-component medium such as PDA than it did on the others.In all the fungicides, Sportak was the most effective suppressor, dehydroacetic acid can
also suppress the fungus, and so did garlic extract.
From the study on refined konyaku starch modification, a new-type coating agents, it could be seen that both sorbic acid and citric acid were the best of all modificative agents in the experimentation because they could enhance the expansivity and the abrasion resistance of konjaku gluccomannan (KGM, 80% of refined konjaku starch). Using KGM modified and other coating agents as major dispersants, and homogenizing the composite hyper-dispersants including nano-ZnO (2%) by High-Pressure-Homogenizer, the effect of dispersedness was very good and much better than that of by ultrasonic traditionally.
When litchi were dipped in coating agents solution and packed in thin plastic bags, the rate of its weight lost was down, while the efficiency of its browning resistance was up. From the experiments with each one of agents individually and compositely, it was illustrated that nano-material was useless when being added into alone but it played a positive role with stronger fungicides such as Sportak together; and that Sportak, dehydroacetic acid and kojic acid, acted a same key roles in keeping-fresh, nevertheless, citric acid always play a negative role .
引文
1 宋光泉等．荔枝栽培、保鲜与市场开拓概况．中山大学学报论丛，1999，4：35-43
2 李义华．我国2002年荔枝产量预计达到130多万吨．中国农业信息快讯，2002，7：30
3 陈辉进，邱水萍．荔枝品种结构调整初探．福建热作科技，2001，3：47-48
4 苏兆瑞：荔枝．生物学教学，1998，11：39
5 李建国，黄辉自，刘向东．荔枝果皮发育细胞学研究．园艺学报，2003，1：23-28
6 潘洵操，谢宝贵．荔枝果皮结构与果实贮藏性能关系的探讨．广西植物，1997．1：79-84
7 谢建华，庞杰．荔枝果实采后生理及保鲜研究进展．保鲜与加工，2003，4：32-36
8 苏美霞等编．荔枝贮藏保鲜及加工新技术．中国农业出版社，北京，2000：1～108
9 程发良，宁满霞，莫金垣等．光荔枝果实中微量元素测定的研究．谱学与光谱分析，2002，4：676-678
10 邓义才．荔枝保藏中的褐变研究进展．广州食品工业科技，1996，4：10-12
11 何文锦，肖华山．荔枝采后生理与保鲜技术研究进展．福建轻纺，2003，4：3-7
12 Akamine E K. Preventing the darkening of fresh lychees prepared for export[A]. Technical Programme Report[C], Hawaii: Hawaii Agricultural Experimental Station, University of Hawaii, 1960,127:17-21.
13 李明启．荔枝果皮多酚氧化酶的研究[J]．植物学报，1963，11：329-337．
14 谭兴杰．荔枝果皮多酚氧化酶酶促褐变的研究[J]．植物生理学报，1987，13：197-203．
15 蒋跃明，傅家瑞．荔枝果实采后生理及贮运保鲜技术研究进展(综述)．亚热带植物通讯，2000，29(3)：64-70
16 吴振先，苏美霞，陈维信等．贮藏荔枝果皮多酚氧化酶及过氧化物酶与褐变的研究．华南农业大学学报，1998，19(1)：12-15
17 庞学群，张昭其．荔枝果皮褐变机理与防褐技术．食品科学，2001，22(1)：94-97
18 赵伟，王莉，张平娟．荔枝果皮褐变机理与防褐保鲜技术研究进展．保鲜与加工，2002，3：6-9
19 王继栋，朱西儒．荔枝采后病害及防治技术研究进展．果树学报，2002，19(2)：128-131
20 王刚．贵州册亨县荔枝病虫害调查初报．中国南方果树，1997，26(3)：31-32
21 吕荣欣．荔枝果实的保鲜．中国果品研究(J)，1983(2)：10-11
22 戚佩坤主编．果蔬贮运病害．北京：中国农业出版社，1994．36
23 黄素华，赖钟雄．荔枝贮藏保鲜研究进展．福建果树，2000，2：12-14
24 吴万兴，李科友，张忠良等．魔芋甘霞聚糖化学结构的研究．林产化学与工业，1997，17(2)：69
25 武利民，周树学．纳米材料和技术应用进展．全国第二届纳米材料和技术应用会
议论文集，36，13．
26 酒金婷，李春霞，王彩凤等．纳米氧化锌在水中的分散行为及其应用．印染，2002，1：1-4
27 胡新宇，宁正祥．荔枝保鲜的研究与发展．食品与发酵工业，27，4：74-78
28 王继栋，朱西儒，孙谷畴．荔枝采后病害与颉颃菌的应用．中国果树，2001，11：42-44
29 武波，韦东，唐咸来等．一株产絮凝剂的曲霉菌株的筛选．微生物学杂志，2001，2：3-5
30 White T J, Bruns T, Lee S. Analysis of phylogenetic relationship by amplification and direct sequening of ribosomal RNA gene [A]. In: Innis M A, ed. PCR Protocol: A Guide to Methods and Application [C]. New York: Academic, 1990, 315～322.
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32 J．萨姆布鲁克，D．W．垃塞尔，et al．分子克隆实验指南，第三版，北京：科学出版社，2002，96～99
33 林日辉．荔枝炭疽病菌及多酚氧化酶对常温保鲜的影响[学位论文]．广西，广西大学，2002
34 Nirenberg,H.I., Feiler, U. and Hagendom,G. Description of Colletotrichum lupini comb. nov. in modern terms[J]. Mycologia 94 (2), 307-320 (2002)
35 张星耀，曹支敏．真菌核糖体基因间隔区研究概况．西北林学院学报，2000，15(2)：107～112
36 张武军，张辉．贮藏防腐新杀菌剂——施保克．四川农业科技，1995，5：20
37 程志斌，葛长荣，苏子峰．大蒜素的研究与应用．饲料博览，2001，12：38-40
38 河南竹林众生只要股份有限公司．氟康唑注射液说明书
39 上海新先锋药业有限公司，注射用两性霉素B使用说明书
40 陈秀敏，傅德贤，欧阳藩．魔芋葡甘露聚糖化学结构及改性研究进展．天然产物研究与开发．2002，2：65-67
41 李波，谢笔钧．魔芋葡甘聚糖可食性膜材料研究(Ⅰ)．食品科学，2000，1：19-22
42 郑达敏，傅吉全．纳米ZnO在水体系中的分散研究[J]．北京服装学院学报，2002，22(1)：6-9．
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48 庞杰，谢建华．固体保鲜缓释剂对荔枝低温保鲜研究，天津农学院学报，2001，2：12-17
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50 山东中舜集团有限公司．曲酸(医药级)使用说明
51 邓光辉，李济权．芒果常温保鲜．广西轻工业，1995，2：22-24
52 于平，岑沛霖．抗褐变剂处理及MAP技术保鲜莴苣效果的研究．食品与发酵工业，2001，9：51-54
53 严景华，李文忠．九种保鲜液膜对草莓常温保鲜效果的研究．安徽农业大学学报(自然科学版)，1999，26(2)：233-236
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