虎奶菇发酵特性及菌丝体、菌核多糖的纯化和部分特性研究
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摘要
本论文采用单因素及正交实验法确立虎奶菇(Pleurotus tuber-regium(Fr．)Sing)发酵最适培养基组成及适宜的摇瓶发酵条件，并对发酵获得的菌丝体营养成分进行分析。采用热水浸提、乙醇沉淀、TCA脱蛋白、H_2O_2脱色、DE-52分级、Sephadex G-200分组分等技术方法从P．tuber-regium发酵菌丝体(mycelia)、菌核(sclerotia)中分离纯化到5个主要的组分均一的水溶性多糖mp-1、mp-2、sp-1、sp-2、sp-3。应用高效液相色谱(HPLC)、琼脂糖电泳、旋光度测定、薄层层析(TLC)、气相色谱(GC)、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)等技术方法分析了多糖的分子量、旋光度、单糖组成与摩尔比等理化性质，表征了多糖的构型、构象、连接方式等一级结构信息。单次大剂量急性毒性试验表明mp-1、sp-3具有很高的安全性能。多糖对环磷酰胺(CY)造模小鼠免疫功能的影响实验表明，mp-1、sp-3能显著的增强小鼠的免疫功能，具有很高的生物活性。
The optimal conditions for submerged fermentation culture of Pleurotus tuber-regium and the nutrition components of mycelia were explored. The extraction, purification, physicochemical characterization and stair configuration of polysaccharides from mycelia and sclerotia of P. tuber- regium were also studied. The acute toxicity and immuno functions of the polysaccharides also been examined.
The research established the suitable fermentative conditions of the mycelia growth of P.tuber-regium. High level of crude proteins, total carbohydrates, reduced sugar ,fatty acids and minerals in the mycelia has been tested. The total amino acid is as high as 10.81% involving 4.73% of essential amino acid.
The crude aqueous-solution polysaccharides were extracted by hot-water. Two main fractions mp-1,mp-2 were obtained from mycelia and three main fractions sp-1, sp-2, sp-3 were obtained from sclerotia after eluting from DE-52 and Sephadex G -200 columns chromatography, HPLC , specific optical rotation and agarose gel electrophoresis showed that the five fractions were homogeneous.
The physicochemical characterization and stair configuration of mp-1, mp-2, sp-1, sp-2,sp-3 were analyzed with HPLC,TLC,GC,UV,IR and NMR et al. The results are showed as follows:
mp-1: [α]~(25)(H_2O) =+23.72°,Mw=17.0372 kDa,total sugar 88.40%,sugar constituents (in a molar ratio):Ara:Rha:Fuc:Fru:Gla:Glc:Man(0.27:5.57:1.98:63.86:10.17:100:28.07), main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α-Gla(1-6)-β-Rha(1-3)-β-Man(1-4)]_m,involved some other glycosyl residues and maybe some branch chain.
mp-2: [α]25(H2O) =+27.55°,Mw=13.7909 kDa,total sugar 96.36%,sugar constitu-ents(in a molar ratio) :Ara:Rha:Fuc:Xyl:Fru:Gla:Glc:GaA(1. 11:0.57:1.66:0.26:8.93:2.37: 100:0.94) ,main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α-Rha(1-6)]_m , involved some other glycosyl residues and maybe some branch chain.
sp-1: [α]~(25)(H_2O) =+11.16°,Mw=16.9610 kDa,total sugar 98.69%,sugar constituents (in amolarratio):Ara:Fuc:Fru:Gla:Glc:Man(1.91:3.81:58.67:4.32:100:14.40),main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α- Glc(1-6)]_m, involved some other glycosyl residues and maybe some
The optimal conditions for submerged fermentation culture of Pleurotus tuber-regium and the nutrition components of mycelia were explored. The extraction, purification, physicochemical characterization and stair configuration of polysaccharides from mycelia and sclerotia of P. tuber- regium were also studied. The acute toxicity and immuno functions of the polysaccharides also been examined.
The research established the suitable fermentative conditions of the mycelia growth of P.tuber-regium. High level of crude proteins, total carbohydrates, reduced sugar ,fatty acids and minerals in the mycelia has been tested. The total amino acid is as high as 10.81% involving 4.73% of essential amino acid.
The crude aqueous-solution polysaccharides were extracted by hot-water. Two main fractions mp-1,mp-2 were obtained from mycelia and three main fractions sp-1, sp-2, sp-3 were obtained from sclerotia after eluting from DE-52 and Sephadex G -200 columns chromatography, HPLC , specific optical rotation and agarose gel electrophoresis showed that the five fractions were homogeneous.
The physicochemical characterization and stair configuration of mp-1, mp-2, sp-1, sp-2,sp-3 were analyzed with HPLC,TLC,GC,UV,IR and NMR et al. The results are showed as follows:
mp-1: [α]~(25)(H_2O) =+23.72°,Mw=17.0372 kDa,total sugar 88.40%,sugar constituents (in a molar ratio):Ara:Rha:Fuc:Fru:Gla:Glc:Man(0.27:5.57:1.98:63.86:10.17:100:28.07), main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α-Gla(1-6)-β-Rha(1-3)-β-Man(1-4)]_m,involved some other glycosyl residues and maybe some branch chain.
mp-2: [α]25(H2O) =+27.55°,Mw=13.7909 kDa,total sugar 96.36%,sugar constitu-ents(in a molar ratio) :Ara:Rha:Fuc:Xyl:Fru:Gla:Glc:GaA(1. 11:0.57:1.66:0.26:8.93:2.37: 100:0.94) ,main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α-Rha(1-6)]_m , involved some other glycosyl residues and maybe some branch chain.
sp-1: [α]~(25)(H_2O) =+11.16°,Mw=16.9610 kDa,total sugar 98.69%,sugar constituents (in amolarratio):Ara:Fuc:Fru:Gla:Glc:Man(1.91:3.81:58.67:4.32:100:14.40),main chain: [β-Glc(1-6)-Fru]_n-[α- Glc(1-6)]_m, involved some other glycosyl residues and maybe some
引文
[1] Humfeld. H An improved laboratory-scale fermentor for submerged culture investigations[J].J Bacteriol, 1947, 54(6): 689-696.
[2] Szuecs J. Method for growing mushroom mycelium and the resulting products[J].United States Patent, 1958, 2, 850, 841.
[3] 陈美聿．香菇的深层培养[J]．实验生物学报，1960(8)：548-565．
[4] Roth J.A. Enhancement of nonspecific resistance to bacterial infection by biologic response modifiers[J]. J.A. Roth (ed), 1988, 329-342.
[5] Lucas E.H, Ringler R.L, Byerrum R.U, et al. Tumor inhibitors in Boletus edulis and other Holobasidiomycetes[J].Antibiot Chemotherapy, 1957, (7): 1-14.
[6] Chihara G, Maeda Y Y, Hamuro J, et al. Inhibition of mouse sarcoma 180 by polysaccharides from lentinus edodes(berk)Sing[J].Nature, 1969, (222): 687-688.
[7] 张士国，邵伟国．灰树花子实体多糖提取方法的比较[J]．中国林副特产，2005，(2)：40-41．
[8] 尉小慧，金青，赵文英．松茸菌与鸡枞菌超微粉碎提取多糖[J]．青岛科技大学学报，2003，24(2)：117-119．
[9] 郭朝晖，梁卿，刘霞，等．Ⅱ型ZTCI+1天然澄清剂在黄芪多糖提纯中的应用[J]．时珍国医国药，2005，16(9)：876-877．
[10] 潘慧娟，应奇才．离心沉淀色谱法分离纯化香菇多糖[J]．中华医药志，2004，3(2)：84-86．
[11] 包秀利，王松婷，王立新．三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的研究[J]．黑龙江医药，2003，16(2)：123-124．
[12] 张俐娜，丁琼，张平义，等．茯苓菌核多糖的分离和结构分析[J]．高等学校化学学报，1997，18(6)：990-993．
[13] 丁琼，张俐娜，张志强．茯苓菌丝体多糖的分离和结构分析[J]．高分子学报，2000，4(2)：224-227．
[14] 高宏伟，李兆兰，刘志礼，等．双孢蘑菇胞外多糖及胞内多糖的分离纯化和化学结构分析[J]．南京中医药大学学报(自然科学版)，1999，15(4)：224-225．
[15] F.J. Cui, W.Y. Tao, Z.H. Xu, et al. Structural analysis of anti-tumor heteropolysaccharide GFPS1b from the cultured mycelia of Grifola frondosa GF9801[J].Bioresource Technology, 2006, offer online before printed.
[16] 梁忠岩，张翼伸，苗春艳．松杉灵芝发酵菌丝体中水溶多糖的分离纯化与结构的比较研究[J]．真菌学报，1994，13(3)：211-214．
[17] Hirotaka Hoshi, Yoko Yagi, Hiroko Iijima, et al. Isolation and Characterization of a Novel Immunomodulatory α-Glucan-Protein Complex from the Mycelium of Tricholoma matsutake in Basidiomycetes[J].J. Agric. Food Chem, 2005(53): 8948-8956.
[18] 殷红，葛长荣，程志斌．生物活性多糖在水产养殖业中的应用前景[J]．兽药与饲料添加剂，2004，9(2)：16-17．
[19] 上海市农业科学院食用菌研究所．中国食用菌志[M]．北京：中国林业出版社，1991．
[20] 张光亚．云南食用菌[M]．昆明：云南人民出版社，1984，84-85．
[21] 应建浙，臧穆．西南地区大型经济真菌[M]．北京：科学出版社，1994．
[22] 黄年来．珍稀食用菌——虎奶菇的开发[J]．江苏食用菌，1995，16(4)：2-3．
[23] Okhuoya J. A., Isikhuemhen O.S., Evue G.A. Pleurotus tuber-regium (Fr.)Sing: Sclerotia and sporophore yield during cultivation on sawdust of different woody plants[J]. The International Journal of Mushroom Sciences, 1998, 2(2): 41-46.
[24] Okhuoya J. A., Okogbo F. O.. Induction of edible sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fr) Sing in the laboratory[J]. Annals of Applied Biology, 1990, 117(2): 295-298.
[25] Okhuoya J. A., Etugo J.E..Studies of the cultivation of Pleurotus tuber-regium (Fr) Sing. an edible mushroom[J].Bioresource Technology, 1993, 44(1): 1-3.
[26] Okhuoya J. A., Okogbo F. O.. Cultivation of Pleurotus tuber-regium (Fr)Sing on various farm wastes[J].Proceedings of the Oklahoma Academy of Science(USA), 1991, (71): 1-3.
[27] 黄年来，郭美英，黄黎红．虎奶菇及其栽培[J]．农技服务，2002，12：24-25．
[28] 江枝和，李三暑，郑永标，等．虎奶菇生物学特性研究[J]．食用菌学报，2000，7(4)：11-17．
[29] 江枝和，李三暑，雷锦桂，等．虎奶菇栽培模式研究[J]．食用菌学报，2001，8(3)：50-54．
[30] 陈传红，泉志坚，李荣同，等．东华虎奶-1号的生物特性及其栽培技术要点[J]．食用菌，2005(1)：14-15．
[31] Fasidi I.O., Olorumaiye K. S. Studies on the requirements for vegetative growth of Pleurotus tuber-regium(Fr)Singer, a Nigerian mushroom[J]. Food Chemistry, 1994, 50(4): 397-401.
[32] 郭嘉铭，黄年来，易骏．虎奶菇深层发酵及氨基酸成份分析[J]．中国野生植物资源，19(2)：42-44．
[33] 李荣同，包水明，余志坚，等．菌核侧耳β-葡萄糖苷酶研究[J]．江西农业大学学报，2004，26(6)：920-922．
[34] 张志强，林文雄．不同液体发酵培养基对虎奶菇菌丝生长的影响[J]．中国食菌，24(4)：33-35．
[35] Ogundana S.k, Fagade Oba. The nutritive value of some Nigerian edible mushrooms[J].Mushroom Science Ⅺ, Proceedings of the Eleventh International Scientific Congress on the Cultivation of Edible Fungi, 1981, 123-131.
[36] 江枝和，李三暑，郑永标，等．虎奶菇菌核和子实体微量元素及氨基酸分析[J]．食用菌学报，2000，7(2)：47-50．
[37] 吴锦忠，黄丽敏，张志强．虎奶菇挥发油成分分析[J]．福建中医学院学报，2002，12(1)：34-35．
[38] Hexiang Wang, T. B. Ng. Isolation of a Novel N-acetylglucosamine-specific lectin from fresh sclerotia of the edible mushroom pleurotus tuber-regium[J]. Protein Expression and Purification, 2003, 29: 156-160.
[39] Hexiang Wang, T. B. Ng. Isolation of pleuturegin, a novel ribosomeinactivating protein from fresh sclerotia of the edible mushroom Pleurotus tuber-regium[J].Biochem Biophys Res Commun, 2001, 288(3): 718-721.
[40] Hexiang Wang, T. B. Ng. Purification and characterization of a potent homodimeric guaninespecific ribonuclease from fresh mushroom(Pleurotus tuber-regium)sclerotia[J].Int J Biochem Cell Biol, 2001, 33(5): 483-490.
[41] Isikhuemhen O.S., Nerud. F. Preliminary studies on the ligninolytic enzymes produced by the tropical fungus Pleurotus tuber-regium(Fr.) Sing[J]. Antonie van Leeuwenhoek, 1996, (75): 257-260.
[42] Mei Zhang, Lina Zhang, PeterC. K. Cheung, et al. Fractionation and Characterization of a Polysaccharide from the sclerotia of Pleurotus tuber-regium by preparative sizeexclusion chromatography[J].J Biochem Biophys Methods. 2003, (56): 281-289.
[43] Lina Zhang, Mei Zhang, Jing Dong, et al. Chemical structure and chain conformation of the water-insoluble glucan isolated from Pleurotus tuber-regium[J].Biopolymers, 2001, 59(6): 457-464.
[44] 邓成华，杨祥良，顾小曼，等．虎奶菌多糖的分离纯化及成分分析[J]．中国药学杂志，2000， 35(5): 296-298.
[45] Chenghua D, Xiangliang Y, Xiaoman G, et al. A beta-D-glucan from the sclerotia of Pleurotus tuber-regium(Fr.)Sing[J]. Carbohydr Res, 2000, 328(4): 629-633.
[46] Cheung PC, Lee MY. Fractionation and characterization of mushroom dietary fiber (nonstarch polysaccharides) as potential Nutraceuticals from Sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fries) singer[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48(8): 3148-3151.
[47] Wong KH, Cheung PC, Wu JZ. Biochemicaland microstructural characteristics of insoluble and soluble dietary fiber prepared from mushroom sclerotia of Pleurotus tuber-regium, Polyporus rhinocerus, and Wolfiporia cocos[J]. J Agric Food Chem. 2003, 51(24): 7197-7202.
[48] 江枝和，翁伯琦，唐建阳，等．不同碳源对虎奶菇菌核蛋白质营养价值的影响[J]．食用菌学报，2002，9(2)：5-9．
[49] Mei Zhang, Lina Zhang, Peter C.K. Cheung. Molecular Mass and chain conformation of Carboxy-methylated Derivatives of β-Glucan from Sclerotia of Pleurotus tuber-regium[J].Biopolymers, 2003, 68(2): 150-159.
[50] Mei Zhang, Lina Zhang, Yifeng Wang, et al. Chain conformation of sulfated derivatives of β-glucan from sclerotia of Pleurotus tuber-reglum[J]. Carbohydr Res. 2003, 338(24): 2863-2870.
[51] 黄必胜，胡衡．虎奶多糖免疫功能实验研究[J]．时珍国医药，2000，11(8)：685-686．
[52] C. Stowe, O.S. Isikhuemhen, H. Nasri. Extracts from Pleurotus tuber-regium and their antimicrobial effects on select food pathogens[J].IFT annual meeting, Chicago, 2003.
[53] 邓成华，杨祥良，王雁，等．硫酸酯化及羧甲基化虎奶多糖的抗病毒作用[J]．中国地方病学杂志，2000，19(4)：251-253．
[54] Zhang M, Cheung PC, Ooi VE, et al. Evaluation of sulfated fungal beta-glucans from the sclerotium of Pleurotus tuber-regium as a potential water-soluble anti-viral agent[J].Carbohydr Res, 2004, 339(13): 2297-2301.
[55] Zhang M, Cheung PC, Zhang L. Evaluation of mushroom dietary fiber (nonstarch polysaccharides) from sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fries) singer as a potential antitumor agent[J].J Agric Food Chem. 2001, 49(10): 5059-5062.
[56] 邓成华，杨祥良，王雁，等．硫酸酯化虎奶多糖的制备及其抗氧化作用研究[J]．中国生化药 物杂志，2001，22(1)：1-4．
[57] 王雁，邓成华，杨祥良，等．羧甲基化虎奶多糖的制备及抗氧化性研究[J]．生物化学与生物物理进展，2000，27(4)：411-414．
[58] 包水明，李荣同，余志坚，等．豆浆、金银花的菌核侧耳发酵饮料的研制[J]．食品与发酵工业，2004，30，(12)：153-154．
[59] 包水明，李荣同，余志坚，等．银杏叶提取液对菌核侧耳菌丝生长的影响及发酵保健饮料的研制[J]．食用菌，2005(2)：48-49．
[60] Fasidi I.O., Ekuere, U.U..Studies on Pleurotus tuber-regium (Fries)Singer: cultivation, proximate composition and mineral content of sclerotia[J]. Food Chemistry, 1993, 48(3): 255-258.
[61] 杨新美．食用菌研究法[M]．北京：中国林业出版杜，1998．
[62] 杜荣骞．生物统计学[M]．北京：高等教育出版社，1999，135-176．
[63] 李继东，林跃鑫．热带小奥德蘑深层发酵工艺研究[J]．食用菌报，2003，10(1)：46-51．
[64] 陈宏伟，周冰斌，朱蕴兰，等．虫草深层培养产多糖条件的优化及多糖组分的研[J]．徐州工程学院学报，2005，20(1)：78-83．
[65] 肖彩霞，王玉红，章克昌．黑木耳深层发酵工艺条件的研究[J]．生物技术，2004，14(5)：70-72．
[66] 无锡轻工学院等合编．食品分析[M]．北京：轻工业出版社，1987，114-225．
[67] 张龙翔．生物化学实验方法和技术[M]．北京：人民教育出版社，1982．
[68] 张惟杰．糖复合物生化研究技术(第二版)[M]．杭州：浙江大学出版社，1994．
[69] 林跃鑫，叶竹秋，黄谚谚，等．巴西蘑菇Agaricus blazei Murill水溶性多糖的分离纯化[J]．药物生物技术，2003，10(4)：238-241．
[70] 王卫国，赵永亮．一种在多糖分离纯化过程中新的脱蛋白方法[J]．中草药，2003，34(10)：891-895．
[71] 王元凤，金征宇．茶多糖脱色的研究[J]．食品与发酵工业，2004，30(12)：60-65．
[72] 包东武，赵永亮，王卫国，等．灰树花多糖脱色技术研究[J]．中国食用菌，2003，22(6)：49-51．
[73] 余晓斌，尤蓉．云芝菌丝体多糖的分离纯化研究[J]．天然产物研究与开发，2003，15(1)：29-31．
[74] 刘晓雯，陈向东，吴梧桐．灰树花菌丝体多糖的分离纯化和理化性质研究[J]．药物生物技 术，2005，12(3)：175-178．
[75] 张旸，尹鸿萍，王曼，等．分子排阻色谱法测定螺旋藻多糖纯度和分子质量[J]．药物生物技术，2004，11(3)：161-164．
[76] 林跃鑫，叶竹秋，黄谚谚，等．巴西蘑菇Agaricus blazei Murill水溶性多糖部分理化性质的研究[J]．食品科学，2002，23(9)：31-33．
[77] 杨焱，周昌艳，白韵琴，等．猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较[J]．菌物系统，2001，20(3)：397-402．
[78] 张劲松，贾薇，邢增涛，等．灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较[J]．菌物学报，2004，23(1)：85-92．
[79] 周晓燕，顾顺明，张文玉，等．发酵法生产猪苓菌丝体及猪苓多糖的研究[J]．工业微生物，2001，31(4)：1-4．
[80] 刘春卉，谢红，刘芰华，等．金耳子实体和发酵菌丝体多糖的分离、纯化与结构比较研究[J]．菌物系统，1998，17(3)：246-250．
[81] 邢增涛，张劲松，谭琦，等．两个赤芝子实体多糖的理化特性分析及结构鉴定[J]．天然产物研究与开发，2003，15(2)：118-121．
[82] 陈芸芸，王伟，丁怡，等．SE-HPLC测定太子神悦胶囊中多糖相对分子质量分布及含量[J]．中国药学杂志，2005，40(7)：540-542．
[83] 陈全斌，陈海燕，李俊，等．HPLC法测定罗汉果多糖的相对分子质量[J]．中草药，2003，34(12)：1075-1076．
[84] 叶姜瑜，谈锋．紫芝多糖的纯化及组分分析[J]．西南师范大学学报(自然科学版)，2002，27(6)：945-949．
[85] 陈帆，高央央．海洋药物羊栖菜中多糖的分离和结构分析[J]．温州师范学院学报，2004，25(2)：25-27．
[86] 张安强，张劲松，潘迎捷．食药用菌多糖的提取、分离纯化与结构分析[J]．食用菌报，2005，12(2)：62-68．
[87] 王展，方积年．高场核磁共振波谱在多糖结构研究中的应用[J]．分析学，2000，28(2)：240-247．
[88] 郝爱友，孙昌俊．精编有机化学教程[M]．济南：山东大学出版社，2003，176-199，439-454．
[89] E. Breitmaier, W. Voelter．~(13)C核磁共振谱——方法及其在有机化学中的应用[J]．穆启运，陈淑英，张振杰，译．兰州，兰州大学出版社，1988．
[90] 孙敬方．动物实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社，2001．
[91] 王开发，支崇远，严惠芳，等．花粉多糖对小鼠急性毒性预试[J]．蜜蜂杂志，2003，(9)：3-4．
[92] 田广燕，李太元，许广波，等．猪苓菌核与猪苓菌丝体中提取多糖对小鼠免疫器官重量影响的比较研究[J]．延边大学农学学报，2005，27(2)：83-86．
[93] 陈炅然，胡庭俊，张瑞孝，等．蕨麻多糖对小鼠免疫功能的影响[J]．中兽医医药杂志，2005，(2)：14-16．
[94] 侯震波，崔进，杨继红．念珠菌多糖升白细胞作用的药理学研究[J]．昆明医学院报，2004，(2)：15-20．
[95] 苗明三．薏苡仁多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]．中医药学报，2002，30(5)：49-50．
[96] 李师鹏，安利国，张红梅．鸡腿蘑多糖对昆明小鼠血清溶菌酶活性影响的研究[J]．中国食用菌，2000，20(4)：36-38．
[97] 姜荷，谷文英．姬松茸菌丝体中各组分多糖的抗肿瘤免疫活性[J]．天然产物研究与开发，2005，17(2)：152-156．
[98] 周昌艳，唐庆九，贾薇，等．不同来源灰树花多糖免疫活性初探[J]．食用菌学报，2004，11(4)：13-17．
[99] 王昭晶，梁忠岩，罗巅辉，等．小刺猴头菌子实体水溶性多糖HPⅡ的结构研究[J]．分子科学学报，2005，21(4)：28-31．
[2] Szuecs J. Method for growing mushroom mycelium and the resulting products[J].United States Patent, 1958, 2, 850, 841.
[3] 陈美聿．香菇的深层培养[J]．实验生物学报，1960(8)：548-565．
[4] Roth J.A. Enhancement of nonspecific resistance to bacterial infection by biologic response modifiers[J]. J.A. Roth (ed), 1988, 329-342.
[5] Lucas E.H, Ringler R.L, Byerrum R.U, et al. Tumor inhibitors in Boletus edulis and other Holobasidiomycetes[J].Antibiot Chemotherapy, 1957, (7): 1-14.
[6] Chihara G, Maeda Y Y, Hamuro J, et al. Inhibition of mouse sarcoma 180 by polysaccharides from lentinus edodes(berk)Sing[J].Nature, 1969, (222): 687-688.
[7] 张士国，邵伟国．灰树花子实体多糖提取方法的比较[J]．中国林副特产，2005，(2)：40-41．
[8] 尉小慧，金青，赵文英．松茸菌与鸡枞菌超微粉碎提取多糖[J]．青岛科技大学学报，2003，24(2)：117-119．
[9] 郭朝晖，梁卿，刘霞，等．Ⅱ型ZTCI+1天然澄清剂在黄芪多糖提纯中的应用[J]．时珍国医国药，2005，16(9)：876-877．
[10] 潘慧娟，应奇才．离心沉淀色谱法分离纯化香菇多糖[J]．中华医药志，2004，3(2)：84-86．
[11] 包秀利，王松婷，王立新．三种不同型号大孔吸附树脂对猪苓多糖纯化的研究[J]．黑龙江医药，2003，16(2)：123-124．
[12] 张俐娜，丁琼，张平义，等．茯苓菌核多糖的分离和结构分析[J]．高等学校化学学报，1997，18(6)：990-993．
[13] 丁琼，张俐娜，张志强．茯苓菌丝体多糖的分离和结构分析[J]．高分子学报，2000，4(2)：224-227．
[14] 高宏伟，李兆兰，刘志礼，等．双孢蘑菇胞外多糖及胞内多糖的分离纯化和化学结构分析[J]．南京中医药大学学报(自然科学版)，1999，15(4)：224-225．
[15] F.J. Cui, W.Y. Tao, Z.H. Xu, et al. Structural analysis of anti-tumor heteropolysaccharide GFPS1b from the cultured mycelia of Grifola frondosa GF9801[J].Bioresource Technology, 2006, offer online before printed.
[16] 梁忠岩，张翼伸，苗春艳．松杉灵芝发酵菌丝体中水溶多糖的分离纯化与结构的比较研究[J]．真菌学报，1994，13(3)：211-214．
[17] Hirotaka Hoshi, Yoko Yagi, Hiroko Iijima, et al. Isolation and Characterization of a Novel Immunomodulatory α-Glucan-Protein Complex from the Mycelium of Tricholoma matsutake in Basidiomycetes[J].J. Agric. Food Chem, 2005(53): 8948-8956.
[18] 殷红，葛长荣，程志斌．生物活性多糖在水产养殖业中的应用前景[J]．兽药与饲料添加剂，2004，9(2)：16-17．
[19] 上海市农业科学院食用菌研究所．中国食用菌志[M]．北京：中国林业出版社，1991．
[20] 张光亚．云南食用菌[M]．昆明：云南人民出版社，1984，84-85．
[21] 应建浙，臧穆．西南地区大型经济真菌[M]．北京：科学出版社，1994．
[22] 黄年来．珍稀食用菌——虎奶菇的开发[J]．江苏食用菌，1995，16(4)：2-3．
[23] Okhuoya J. A., Isikhuemhen O.S., Evue G.A. Pleurotus tuber-regium (Fr.)Sing: Sclerotia and sporophore yield during cultivation on sawdust of different woody plants[J]. The International Journal of Mushroom Sciences, 1998, 2(2): 41-46.
[24] Okhuoya J. A., Okogbo F. O.. Induction of edible sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fr) Sing in the laboratory[J]. Annals of Applied Biology, 1990, 117(2): 295-298.
[25] Okhuoya J. A., Etugo J.E..Studies of the cultivation of Pleurotus tuber-regium (Fr) Sing. an edible mushroom[J].Bioresource Technology, 1993, 44(1): 1-3.
[26] Okhuoya J. A., Okogbo F. O.. Cultivation of Pleurotus tuber-regium (Fr)Sing on various farm wastes[J].Proceedings of the Oklahoma Academy of Science(USA), 1991, (71): 1-3.
[27] 黄年来，郭美英，黄黎红．虎奶菇及其栽培[J]．农技服务，2002，12：24-25．
[28] 江枝和，李三暑，郑永标，等．虎奶菇生物学特性研究[J]．食用菌学报，2000，7(4)：11-17．
[29] 江枝和，李三暑，雷锦桂，等．虎奶菇栽培模式研究[J]．食用菌学报，2001，8(3)：50-54．
[30] 陈传红，泉志坚，李荣同，等．东华虎奶-1号的生物特性及其栽培技术要点[J]．食用菌，2005(1)：14-15．
[31] Fasidi I.O., Olorumaiye K. S. Studies on the requirements for vegetative growth of Pleurotus tuber-regium(Fr)Singer, a Nigerian mushroom[J]. Food Chemistry, 1994, 50(4): 397-401.
[32] 郭嘉铭，黄年来，易骏．虎奶菇深层发酵及氨基酸成份分析[J]．中国野生植物资源，19(2)：42-44．
[33] 李荣同，包水明，余志坚，等．菌核侧耳β-葡萄糖苷酶研究[J]．江西农业大学学报，2004，26(6)：920-922．
[34] 张志强，林文雄．不同液体发酵培养基对虎奶菇菌丝生长的影响[J]．中国食菌，24(4)：33-35．
[35] Ogundana S.k, Fagade Oba. The nutritive value of some Nigerian edible mushrooms[J].Mushroom Science Ⅺ, Proceedings of the Eleventh International Scientific Congress on the Cultivation of Edible Fungi, 1981, 123-131.
[36] 江枝和，李三暑，郑永标，等．虎奶菇菌核和子实体微量元素及氨基酸分析[J]．食用菌学报，2000，7(2)：47-50．
[37] 吴锦忠，黄丽敏，张志强．虎奶菇挥发油成分分析[J]．福建中医学院学报，2002，12(1)：34-35．
[38] Hexiang Wang, T. B. Ng. Isolation of a Novel N-acetylglucosamine-specific lectin from fresh sclerotia of the edible mushroom pleurotus tuber-regium[J]. Protein Expression and Purification, 2003, 29: 156-160.
[39] Hexiang Wang, T. B. Ng. Isolation of pleuturegin, a novel ribosomeinactivating protein from fresh sclerotia of the edible mushroom Pleurotus tuber-regium[J].Biochem Biophys Res Commun, 2001, 288(3): 718-721.
[40] Hexiang Wang, T. B. Ng. Purification and characterization of a potent homodimeric guaninespecific ribonuclease from fresh mushroom(Pleurotus tuber-regium)sclerotia[J].Int J Biochem Cell Biol, 2001, 33(5): 483-490.
[41] Isikhuemhen O.S., Nerud. F. Preliminary studies on the ligninolytic enzymes produced by the tropical fungus Pleurotus tuber-regium(Fr.) Sing[J]. Antonie van Leeuwenhoek, 1996, (75): 257-260.
[42] Mei Zhang, Lina Zhang, PeterC. K. Cheung, et al. Fractionation and Characterization of a Polysaccharide from the sclerotia of Pleurotus tuber-regium by preparative sizeexclusion chromatography[J].J Biochem Biophys Methods. 2003, (56): 281-289.
[43] Lina Zhang, Mei Zhang, Jing Dong, et al. Chemical structure and chain conformation of the water-insoluble glucan isolated from Pleurotus tuber-regium[J].Biopolymers, 2001, 59(6): 457-464.
[44] 邓成华，杨祥良，顾小曼，等．虎奶菌多糖的分离纯化及成分分析[J]．中国药学杂志，2000， 35(5): 296-298.
[45] Chenghua D, Xiangliang Y, Xiaoman G, et al. A beta-D-glucan from the sclerotia of Pleurotus tuber-regium(Fr.)Sing[J]. Carbohydr Res, 2000, 328(4): 629-633.
[46] Cheung PC, Lee MY. Fractionation and characterization of mushroom dietary fiber (nonstarch polysaccharides) as potential Nutraceuticals from Sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fries) singer[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48(8): 3148-3151.
[47] Wong KH, Cheung PC, Wu JZ. Biochemicaland microstructural characteristics of insoluble and soluble dietary fiber prepared from mushroom sclerotia of Pleurotus tuber-regium, Polyporus rhinocerus, and Wolfiporia cocos[J]. J Agric Food Chem. 2003, 51(24): 7197-7202.
[48] 江枝和，翁伯琦，唐建阳，等．不同碳源对虎奶菇菌核蛋白质营养价值的影响[J]．食用菌学报，2002，9(2)：5-9．
[49] Mei Zhang, Lina Zhang, Peter C.K. Cheung. Molecular Mass and chain conformation of Carboxy-methylated Derivatives of β-Glucan from Sclerotia of Pleurotus tuber-regium[J].Biopolymers, 2003, 68(2): 150-159.
[50] Mei Zhang, Lina Zhang, Yifeng Wang, et al. Chain conformation of sulfated derivatives of β-glucan from sclerotia of Pleurotus tuber-reglum[J]. Carbohydr Res. 2003, 338(24): 2863-2870.
[51] 黄必胜，胡衡．虎奶多糖免疫功能实验研究[J]．时珍国医药，2000，11(8)：685-686．
[52] C. Stowe, O.S. Isikhuemhen, H. Nasri. Extracts from Pleurotus tuber-regium and their antimicrobial effects on select food pathogens[J].IFT annual meeting, Chicago, 2003.
[53] 邓成华，杨祥良，王雁，等．硫酸酯化及羧甲基化虎奶多糖的抗病毒作用[J]．中国地方病学杂志，2000，19(4)：251-253．
[54] Zhang M, Cheung PC, Ooi VE, et al. Evaluation of sulfated fungal beta-glucans from the sclerotium of Pleurotus tuber-regium as a potential water-soluble anti-viral agent[J].Carbohydr Res, 2004, 339(13): 2297-2301.
[55] Zhang M, Cheung PC, Zhang L. Evaluation of mushroom dietary fiber (nonstarch polysaccharides) from sclerotia of Pleurotus tuber-regium (Fries) singer as a potential antitumor agent[J].J Agric Food Chem. 2001, 49(10): 5059-5062.
[56] 邓成华，杨祥良，王雁，等．硫酸酯化虎奶多糖的制备及其抗氧化作用研究[J]．中国生化药 物杂志，2001，22(1)：1-4．
[57] 王雁，邓成华，杨祥良，等．羧甲基化虎奶多糖的制备及抗氧化性研究[J]．生物化学与生物物理进展，2000，27(4)：411-414．
[58] 包水明，李荣同，余志坚，等．豆浆、金银花的菌核侧耳发酵饮料的研制[J]．食品与发酵工业，2004，30，(12)：153-154．
[59] 包水明，李荣同，余志坚，等．银杏叶提取液对菌核侧耳菌丝生长的影响及发酵保健饮料的研制[J]．食用菌，2005(2)：48-49．
[60] Fasidi I.O., Ekuere, U.U..Studies on Pleurotus tuber-regium (Fries)Singer: cultivation, proximate composition and mineral content of sclerotia[J]. Food Chemistry, 1993, 48(3): 255-258.
[61] 杨新美．食用菌研究法[M]．北京：中国林业出版杜，1998．
[62] 杜荣骞．生物统计学[M]．北京：高等教育出版社，1999，135-176．
[63] 李继东，林跃鑫．热带小奥德蘑深层发酵工艺研究[J]．食用菌报，2003，10(1)：46-51．
[64] 陈宏伟，周冰斌，朱蕴兰，等．虫草深层培养产多糖条件的优化及多糖组分的研[J]．徐州工程学院学报，2005，20(1)：78-83．
[65] 肖彩霞，王玉红，章克昌．黑木耳深层发酵工艺条件的研究[J]．生物技术，2004，14(5)：70-72．
[66] 无锡轻工学院等合编．食品分析[M]．北京：轻工业出版社，1987，114-225．
[67] 张龙翔．生物化学实验方法和技术[M]．北京：人民教育出版社，1982．
[68] 张惟杰．糖复合物生化研究技术(第二版)[M]．杭州：浙江大学出版社，1994．
[69] 林跃鑫，叶竹秋，黄谚谚，等．巴西蘑菇Agaricus blazei Murill水溶性多糖的分离纯化[J]．药物生物技术，2003，10(4)：238-241．
[70] 王卫国，赵永亮．一种在多糖分离纯化过程中新的脱蛋白方法[J]．中草药，2003，34(10)：891-895．
[71] 王元凤，金征宇．茶多糖脱色的研究[J]．食品与发酵工业，2004，30(12)：60-65．
[72] 包东武，赵永亮，王卫国，等．灰树花多糖脱色技术研究[J]．中国食用菌，2003，22(6)：49-51．
[73] 余晓斌，尤蓉．云芝菌丝体多糖的分离纯化研究[J]．天然产物研究与开发，2003，15(1)：29-31．
[74] 刘晓雯，陈向东，吴梧桐．灰树花菌丝体多糖的分离纯化和理化性质研究[J]．药物生物技 术，2005，12(3)：175-178．
[75] 张旸，尹鸿萍，王曼，等．分子排阻色谱法测定螺旋藻多糖纯度和分子质量[J]．药物生物技术，2004，11(3)：161-164．
[76] 林跃鑫，叶竹秋，黄谚谚，等．巴西蘑菇Agaricus blazei Murill水溶性多糖部分理化性质的研究[J]．食品科学，2002，23(9)：31-33．
[77] 杨焱，周昌艳，白韵琴，等．猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较[J]．菌物系统，2001，20(3)：397-402．
[78] 张劲松，贾薇，邢增涛，等．灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较[J]．菌物学报，2004，23(1)：85-92．
[79] 周晓燕，顾顺明，张文玉，等．发酵法生产猪苓菌丝体及猪苓多糖的研究[J]．工业微生物，2001，31(4)：1-4．
[80] 刘春卉，谢红，刘芰华，等．金耳子实体和发酵菌丝体多糖的分离、纯化与结构比较研究[J]．菌物系统，1998，17(3)：246-250．
[81] 邢增涛，张劲松，谭琦，等．两个赤芝子实体多糖的理化特性分析及结构鉴定[J]．天然产物研究与开发，2003，15(2)：118-121．
[82] 陈芸芸，王伟，丁怡，等．SE-HPLC测定太子神悦胶囊中多糖相对分子质量分布及含量[J]．中国药学杂志，2005，40(7)：540-542．
[83] 陈全斌，陈海燕，李俊，等．HPLC法测定罗汉果多糖的相对分子质量[J]．中草药，2003，34(12)：1075-1076．
[84] 叶姜瑜，谈锋．紫芝多糖的纯化及组分分析[J]．西南师范大学学报(自然科学版)，2002，27(6)：945-949．
[85] 陈帆，高央央．海洋药物羊栖菜中多糖的分离和结构分析[J]．温州师范学院学报，2004，25(2)：25-27．
[86] 张安强，张劲松，潘迎捷．食药用菌多糖的提取、分离纯化与结构分析[J]．食用菌报，2005，12(2)：62-68．
[87] 王展，方积年．高场核磁共振波谱在多糖结构研究中的应用[J]．分析学，2000，28(2)：240-247．
[88] 郝爱友，孙昌俊．精编有机化学教程[M]．济南：山东大学出版社，2003，176-199，439-454．
[89] E. Breitmaier, W. Voelter．~(13)C核磁共振谱——方法及其在有机化学中的应用[J]．穆启运，陈淑英，张振杰，译．兰州，兰州大学出版社，1988．
[90] 孙敬方．动物实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社，2001．
[91] 王开发，支崇远，严惠芳，等．花粉多糖对小鼠急性毒性预试[J]．蜜蜂杂志，2003，(9)：3-4．
[92] 田广燕，李太元，许广波，等．猪苓菌核与猪苓菌丝体中提取多糖对小鼠免疫器官重量影响的比较研究[J]．延边大学农学学报，2005，27(2)：83-86．
[93] 陈炅然，胡庭俊，张瑞孝，等．蕨麻多糖对小鼠免疫功能的影响[J]．中兽医医药杂志，2005，(2)：14-16．
[94] 侯震波，崔进，杨继红．念珠菌多糖升白细胞作用的药理学研究[J]．昆明医学院报，2004，(2)：15-20．
[95] 苗明三．薏苡仁多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]．中医药学报，2002，30(5)：49-50．
[96] 李师鹏，安利国，张红梅．鸡腿蘑多糖对昆明小鼠血清溶菌酶活性影响的研究[J]．中国食用菌，2000，20(4)：36-38．
[97] 姜荷，谷文英．姬松茸菌丝体中各组分多糖的抗肿瘤免疫活性[J]．天然产物研究与开发，2005，17(2)：152-156．
[98] 周昌艳，唐庆九，贾薇，等．不同来源灰树花多糖免疫活性初探[J]．食用菌学报，2004，11(4)：13-17．
[99] 王昭晶，梁忠岩，罗巅辉，等．小刺猴头菌子实体水溶性多糖HPⅡ的结构研究[J]．分子科学学报，2005，21(4)：28-31．
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