药用真菌猪苓He-Ne激光及紫外线诱变育种的研究
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摘要
本文以药用真菌猪苓为研究对象，采用He-Ne激光及紫外线两种诱变处理对猪苓出发菌株菌丝体进行了单一诱变剂诱变和复合诱变。通过测量诱变菌落直径初步确定菌丝生长速率，从各单一诱变剂诱变和复合诱变中均获得的生长速率不同程度提高的变异菌株。
对于初步筛选的变异菌株L3-7、U1-7、LU-7，测量了液体培养条件下的菌丝干重生长曲线、胞外粗多糖的动态积累、三种与碳素营养相关的酶的活性变化情况，从而进一步筛选出了生长量和胞外粗多糖产量均比出发菌株有显著提高的优势变异菌株LU-7。该菌株经酯酶同工酶谱分析，酶带条数和Rf值均发生了显著变化，同时通过传代稳定性试验分析，都表明该菌株遗传物质发生了改变且遗传稳定性好。
对菌株LU-7的液体培养基进行了优化，包括碳源、氮源以及无机元素，还发现附加一定量的青冈木煮液，能明显提高菌丝生长速度和胞外多糖积累。同时优化了部分优势变异菌株的培养条件。菌株LU-7在经筛选的优化培养基上生长的最大菌丝体干重为165.5mg/30ml，比在基本培养基上生长的出发菌株高出了74.9％。LU-7在第11天达到产糖高峰期，为5.42mg／ml，比出发菌株的2.78mg／ml提高了95.0％。
LU-7菌丝发酵滤液经Sevag法除蛋白，减压浓缩，95％乙醇沉淀，丙酮、乙醚洗涤等步骤获得了粗品胞外多糖，再经葡聚糖凝胶柱层析获得纯品多糖。采用薄层层析和纸层析分析了该菌株与出发菌株纯品多糖酸水解的单糖组成，发现其单糖组分都是以甘露糖为主。同时还对比了两者的红外光图谱，两者具有相同的特征吸收峰。说明优势变异菌株的胞外多糖并未发生变异。
In this paper, the starting strain of medicinal fungus-Polyporus umbellatus were mutagenized by He-Ne laser, UV and the multiple-irradiation of both the two mutagens. The colonial diameters of mutants were measured to define the mycelial growth rates and to screen out the strain- L3-7, U1-7, LU-7- with higher growth rates.
Then the mycelial dry weight, the yields of crude extracellular polysaccharide and activities of three extracellular enzymes of the pre-selected mutants were tested to select the mutant strain LU-7 with the good characteristics in the three aspects. The analysis of the isoenzyme zymogram of esterase indicated that the mutants' esterase isoenzyme patterns and Rf value were different from the starting strain. The stabilitis on the growth rates and extracellular polysaccharide of different generations of the mutant strain were investigated. All these showed that the mutant's genetic substances had changed and had the good genetic stability.
The liquid medium components and part of the culture conditions for this mutant were optimized, including carbon source, nitrogen source, inorganic elements, ventilatory condition, culture temperature and the addition of the natural material extract. It was found that the addition of the extract of C.glauca sawdust did good effect on the mycelial growth and extracellular polysaccharide yields. The greatest mycelial dry weight of LU-7 in the optimized medium was 165.5mg/30ml which was 74.9% higher than the starting strain in the basic medium. Its yields of crude extracellular polysaccharide was 5.42mg/ml which is 95.0% higher than the starting strain in the basic medium.
The extracellular crude polysaccharide of the mutant was prepared by ethanol precipitation from fermentation product of the mutant. The protein in it was removed by the Sevag procedure. It was further purified by SephadexG-50 and SephadexG-150 column chromatography respectively. It was homogenous as determined by UV-spectrum, gel filtration and polyacrylamide gel electrophoresis. The components of the polysaccharide of the mutant and the starting strain were identified by TLC and PC. Results showed that the two kinds of polysaccharide were composed of mannose. The infrared spectrometry analysis showed that the polysaccharide of the mutant and the starting strain had the same characteristic absorption peaks and that proved the polysaccharide of the mutants was similar to the starting strain.
对于初步筛选的变异菌株L3-7、U1-7、LU-7，测量了液体培养条件下的菌丝干重生长曲线、胞外粗多糖的动态积累、三种与碳素营养相关的酶的活性变化情况，从而进一步筛选出了生长量和胞外粗多糖产量均比出发菌株有显著提高的优势变异菌株LU-7。该菌株经酯酶同工酶谱分析，酶带条数和Rf值均发生了显著变化，同时通过传代稳定性试验分析，都表明该菌株遗传物质发生了改变且遗传稳定性好。
对菌株LU-7的液体培养基进行了优化，包括碳源、氮源以及无机元素，还发现附加一定量的青冈木煮液，能明显提高菌丝生长速度和胞外多糖积累。同时优化了部分优势变异菌株的培养条件。菌株LU-7在经筛选的优化培养基上生长的最大菌丝体干重为165.5mg/30ml，比在基本培养基上生长的出发菌株高出了74.9％。LU-7在第11天达到产糖高峰期，为5.42mg／ml，比出发菌株的2.78mg／ml提高了95.0％。
LU-7菌丝发酵滤液经Sevag法除蛋白，减压浓缩，95％乙醇沉淀，丙酮、乙醚洗涤等步骤获得了粗品胞外多糖，再经葡聚糖凝胶柱层析获得纯品多糖。采用薄层层析和纸层析分析了该菌株与出发菌株纯品多糖酸水解的单糖组成，发现其单糖组分都是以甘露糖为主。同时还对比了两者的红外光图谱，两者具有相同的特征吸收峰。说明优势变异菌株的胞外多糖并未发生变异。
In this paper, the starting strain of medicinal fungus-Polyporus umbellatus were mutagenized by He-Ne laser, UV and the multiple-irradiation of both the two mutagens. The colonial diameters of mutants were measured to define the mycelial growth rates and to screen out the strain- L3-7, U1-7, LU-7- with higher growth rates.
Then the mycelial dry weight, the yields of crude extracellular polysaccharide and activities of three extracellular enzymes of the pre-selected mutants were tested to select the mutant strain LU-7 with the good characteristics in the three aspects. The analysis of the isoenzyme zymogram of esterase indicated that the mutants' esterase isoenzyme patterns and Rf value were different from the starting strain. The stabilitis on the growth rates and extracellular polysaccharide of different generations of the mutant strain were investigated. All these showed that the mutant's genetic substances had changed and had the good genetic stability.
The liquid medium components and part of the culture conditions for this mutant were optimized, including carbon source, nitrogen source, inorganic elements, ventilatory condition, culture temperature and the addition of the natural material extract. It was found that the addition of the extract of C.glauca sawdust did good effect on the mycelial growth and extracellular polysaccharide yields. The greatest mycelial dry weight of LU-7 in the optimized medium was 165.5mg/30ml which was 74.9% higher than the starting strain in the basic medium. Its yields of crude extracellular polysaccharide was 5.42mg/ml which is 95.0% higher than the starting strain in the basic medium.
The extracellular crude polysaccharide of the mutant was prepared by ethanol precipitation from fermentation product of the mutant. The protein in it was removed by the Sevag procedure. It was further purified by SephadexG-50 and SephadexG-150 column chromatography respectively. It was homogenous as determined by UV-spectrum, gel filtration and polyacrylamide gel electrophoresis. The components of the polysaccharide of the mutant and the starting strain were identified by TLC and PC. Results showed that the two kinds of polysaccharide were composed of mannose. The infrared spectrometry analysis showed that the polysaccharide of the mutant and the starting strain had the same characteristic absorption peaks and that proved the polysaccharide of the mutants was similar to the starting strain.
引文
[1] 中华药海(上册)．哈尔滨：哈尔滨出版社，1993：813
[2] 应建浙．药菌功能和毒草鉴别．食用菌．1982(3)：47
[3] 田秀，张永恒．猪苓多糖静脉注射剂的研制．中草药，1980，11(5)：206-208
[4] 江苏新医学院．中药大辞典．上海：上海人民出版社1977：2191．
[5] 王淑芳，王成福．猪苓菌核生长情况的调查．中草药，1982，13(3)：29-31．
[6] 许广波，傅伟杰，石铁源等．黄泥河林区野生猪苓产地生态及资源状况．华北大学学报，2003，3(1)：73-75．
[7] 李梁，罗英，熊东红等．野生猪苓及其生态环境理化特性的分析研究．中国中医药信息杂志，2001，8(7)：32-33．
[8] 韩汝城，樊元元．猪苓生物学特性初步研究．药用植物科研论文选编，1983：153-158．
[9] 李世权等．猪苓人工栽培技术的研究．陕西中医学院学报，1985，8(2)：29-31．
[10] 殷红，顾芳红等．几种环境因素对猪苓菌丝生长的影响．陕西中医学院学报，2001，24(4)：50-51
[11] 徐锦堂．中国药用真菌学．北京医科大学·中国协和医科大学联合出版社，1997
[12] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓菌核结构性质的研究．真菌学报，1991，10(4)：312-317．
[13] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓菌核生长发育规律观察．中国医学杂志，1991，26(12)：714-716．
[14] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓子实体发育的形态学研究．中国医学科学院学报，1998，20(1)：60-63．
[15] 川村清一．原色日本菌图鉴．(第一册)．东京：东京风间书房，1954：130．
[16] 山西省猪苓科研协作组．猪苓生态环境及生物学特性的调查研究初报，中药材科技，1981，(3)：7-11．
[17] 郭顺星，徐锦堂．猪苓菌核的营养来源及蜜环菌的关系．植物学报，1992，34(8)：576-580．
[18] 郭顺星，徐锦堂．蜜环菌侵染猪苓菌核的细胞学研究．植物学报，1993，35(1)：44-50．
[19] 郭顺星，徐锦堂．蜜环菌侵染厚猪苓菌核防御结构的发生及功能．真菌学报，1993，12(4)：283-288．
[20] 郭顺星，曹文琴等．猪苓与蜜环菌共生过程中猪苓菌核不同部位糖类成分的含量研究．中国药学杂志，2002，37(7)：493-495．
[21] 夏洪燕，郭顺星．蜜环菌激发子有到猪苓细胞产生活性氧及其相关酶的变化．微生物学通报，2001，28(3)：22-26
[22] 郭顺星，王秋颖等．猪苓菌丝形成菌核伴生菌的发现及应用．植物学报，2002，44(10)：1151-1154．
[23] 樱井善次郎．中药猪苓的成分．日本药报，1937，12(8)：23．
[24] Ohta.K et al.Sterol constituents from the sclerotium of Polyporus umbellatus fries,Natural Medicines,50(2): 179-181.
[25] 吉冈一郎，山本忠宏．猪苓成分的研究—2-羟基二十四碳酸．药学杂志，1964，84(8)：742-744．
[26] Ohsawa T,et al.Studies on constituents of fruit body of Polyporus umbellatus and their cytotoxic activity.Chem.Pharm.Bull,1992,40(1):143-147.
[27] Inaoka.Y,et al.Studies on active substances in herbs used for hair treatmem.I Effects of herb extracts on hair growth and isolation of an active substance from Polyporus umbellatus F.Chem.Pharm.Bull. 1994,42(3):530-533.
[28] Lu W,et al.Platelet aggregation potentiators from cho Rei. Chem. Pharm.Bull, 1985, 33(11): 5083-5087.
[29] Miyazaki T.Okiwa.N.Studies on fungal polysaccharide.Ⅶ water-soluble polysaccharide of Grifola umbellate (Pers.ex Fr) Pilat.Chem.Pharm.Bull, 1973,21 (11):2545.
[30] 吴东儒．糖类的生物化学．北京：高等教育出版社，1987．
[31] T.Qgawa and T.kaburaeh.ibid. 1982,103:53-64
[32] Y.Uneo et al. ibid. 1982,101:160-167
[33] 冯青然等．猪苓多糖分子量分布和特征粘数的测定．中药通报，1987，12(1)：38-40
[34] 朱勤，戴如琴等．猪苓发酵液多糖组分及摩尔比的测定．中药通报，1988，13(9)：32-33
[35] 沈文君等．猪苓、玉米须、黄芪、木通、淡竹叶的利尿作用．上海第一医学院学报，1957，38(1)
[36] 王利文，苏成业，刘国雄等．猪苓的利尿作用．药学学报，1964，11(12)：815-818
[37] 江苏新医学院．中药大辞典(下册)．北京：人民卫生出版社，1997：2191-2193
[38] 中医研究院中药研究所药理室、肿瘤组．猪苓的抗肿瘤作用研究．新医药学杂志，1979(2)：15-18
[39] 郑绳一．猪苓多糖治疗肿瘤研究阶段鉴定会．医药工业，1980(3)：45
[40] 张昌菊等．猪苓多糖抗肿瘤作用的机制研究．使用医学进修杂志·宜昌医学高专学报，1995，23(3)：150-152
[41] 沙静妹．猪苓多糖．药学通报，1985，20(2)：74-75
[42] 赵德来，谢锦玉．猪苓多糖和氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞的作用——细胞化学研究．解剖学报，1986，17(2)：186-189
[43] 张辉．猪苓多糖抗诱变性的研究．中成药，1993(1)：13-14
[44] 罗光．猪苓多糖(757)对体外培养细胞衰老过程中DNA含量影响的初步观察．老年医学专刊，1982，10(3)：94-97
[45] 张忠诚．改善艾滋病症状的猪苓制剂．国外医药·植物药分册，1996，11(2)：90
[46] 符慧娟，李永．猪苓汤临床新应用．吉林中医药，2003，23(9)：43
[47] 李世权．猪苓生态环境调查和野生变家种的初步研究．中药材科技，1980(3)：13-15
[48] 张言良，陈功夫等．猪苓人工栽培初报．陕西新医药，1978(2)：65-66
[49] 李式权等．猪苓人工栽培技术的研究．中药材科技，1981(4)：2-4
[50] 王学勇，汪洋，牟和等．水培法培育猪苓菌和．中药材科技，1982(3)：2-5
[51] 王淑芳等．猪苓菌核的组织分离及纯菌种的固体培养．微生物学通报，1978，5(4)：1-3
[52] 戴如琴，刘文巨，兰江丽．猪苓菌丝体的液体培养及其抗肿瘤作用的研究．新医药学杂志．1979(2)：19-22
[53] 王秋颖，徐锦堂．蜜环军发酵液在猪苓菌发酵过程中的应用．中国药学杂志，1993，28(8)：466
[54] 胡贵权．食用菌液体菌种的制作及应用．食用菌，1998，20(1)：17-18
[55] 俞俊棠，唐孝宣．生物工艺学(上册)．华东理工大学出版社：84
[56] 陈五岭等．He-Ne激光幅照红霉素链霉菌诱变育种的研究．光子学报，1998(6)：539-542
[57] 倪新立，丁立孝，潘迎捷等．姬松茸在两种培养基上生长期间九种胞外酶活性变化．菌物系统，2001，20(2)：222-227
[58] 刘斌，李政祥．香菇对木质纤维素的降解及其有关酶活的变化．广西农学院学报，1991，10(3)：57-62
[59] 李蕤，吴克，骆军等．金针姑固体培养几种胞外酶活力变化的研究．中国食用菌，2001，21(1)：12-14
[60] 何忠孝，张树政．生物化学实验技术丛书·电泳(第二版)．北京：科学出版社，1997：297
[61] 杨泽田等．分子生物学实验技术．西安：第四军医大学出版社，1988：427
[62] 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定．药学通报，1984，19(10)：46-49
[63] 夏尔宁，陈琼华．黑木耳多糖的分离、纯化、鉴定．生物化学及生物物理学胞，1988，20(6)：614-617
[64] 吴梧桐，余品华，夏尔宁等．银耳多糖TF-A、TF-B、TF-C的分离、纯化及组成单糖的鉴定．生物化学及生物物理学，1984，16(4)：393-398
[65] 武金霞，张贺迎，杨睿等．双孢蘑菇子实体多糖的提取及单糖组成．中国食用菌，2003，22(1)：31-33
[66] 李如亮．生物化学实验．武汉：武汉大学出版社，1998：14-16
[67] 张翼伸．多糖的结构测定．生物化学与生物物理学进展，1983，(5)：18-23
[68] 丁玉强，陈春英，Elmahadi.E.A等．箬叶水溶性多糖的色谱研究．色谱，1996，14(6)：470-472
[69] 孟宪纾．中成药分析(第二版)．北京：人民卫生出版社，1998：645
[70] 张承圭．生物化学仪器分析与技术．北京：高等教育出版社，1990
[71] 周与良，邢来君．真菌学．北京：高等教育出版社，1991：94-96
[72] 王玉万，王云．构菌栽培过程中对木质纤维素的讲解和几种多糖分解酶的活性变化．微生物学通报，1989，16(3)：137-140
[73] 顾芳红，殷红，马劲．碳、氮源对猪苓菌丝省长与胞外多糖含量的影响．西北大学学报，2001，31(5)：437-440
[74] 李兆兰，李学信．褶裂菌胞内多糖的分离、纯化、鉴定及性质．真菌学报，1994，13(4)：267-272
[75] 李兆兰．褶裂多糖的结构研究．南京大学学报，1994，30(3)：482-486
[76] Parker F S. Application of infrared, Raman and Resonance Raman Spectroscopy in BiOchemistry. America Aldrich Chemical Company INC, 1982: 132
[2] 应建浙．药菌功能和毒草鉴别．食用菌．1982(3)：47
[3] 田秀，张永恒．猪苓多糖静脉注射剂的研制．中草药，1980，11(5)：206-208
[4] 江苏新医学院．中药大辞典．上海：上海人民出版社1977：2191．
[5] 王淑芳，王成福．猪苓菌核生长情况的调查．中草药，1982，13(3)：29-31．
[6] 许广波，傅伟杰，石铁源等．黄泥河林区野生猪苓产地生态及资源状况．华北大学学报，2003，3(1)：73-75．
[7] 李梁，罗英，熊东红等．野生猪苓及其生态环境理化特性的分析研究．中国中医药信息杂志，2001，8(7)：32-33．
[8] 韩汝城，樊元元．猪苓生物学特性初步研究．药用植物科研论文选编，1983：153-158．
[9] 李世权等．猪苓人工栽培技术的研究．陕西中医学院学报，1985，8(2)：29-31．
[10] 殷红，顾芳红等．几种环境因素对猪苓菌丝生长的影响．陕西中医学院学报，2001，24(4)：50-51
[11] 徐锦堂．中国药用真菌学．北京医科大学·中国协和医科大学联合出版社，1997
[12] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓菌核结构性质的研究．真菌学报，1991，10(4)：312-317．
[13] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓菌核生长发育规律观察．中国医学杂志，1991，26(12)：714-716．
[14] 郭顺星，徐锦堂等．猪苓子实体发育的形态学研究．中国医学科学院学报，1998，20(1)：60-63．
[15] 川村清一．原色日本菌图鉴．(第一册)．东京：东京风间书房，1954：130．
[16] 山西省猪苓科研协作组．猪苓生态环境及生物学特性的调查研究初报，中药材科技，1981，(3)：7-11．
[17] 郭顺星，徐锦堂．猪苓菌核的营养来源及蜜环菌的关系．植物学报，1992，34(8)：576-580．
[18] 郭顺星，徐锦堂．蜜环菌侵染猪苓菌核的细胞学研究．植物学报，1993，35(1)：44-50．
[19] 郭顺星，徐锦堂．蜜环菌侵染厚猪苓菌核防御结构的发生及功能．真菌学报，1993，12(4)：283-288．
[20] 郭顺星，曹文琴等．猪苓与蜜环菌共生过程中猪苓菌核不同部位糖类成分的含量研究．中国药学杂志，2002，37(7)：493-495．
[21] 夏洪燕，郭顺星．蜜环菌激发子有到猪苓细胞产生活性氧及其相关酶的变化．微生物学通报，2001，28(3)：22-26
[22] 郭顺星，王秋颖等．猪苓菌丝形成菌核伴生菌的发现及应用．植物学报，2002，44(10)：1151-1154．
[23] 樱井善次郎．中药猪苓的成分．日本药报，1937，12(8)：23．
[24] Ohta.K et al.Sterol constituents from the sclerotium of Polyporus umbellatus fries,Natural Medicines,50(2): 179-181.
[25] 吉冈一郎，山本忠宏．猪苓成分的研究—2-羟基二十四碳酸．药学杂志，1964，84(8)：742-744．
[26] Ohsawa T,et al.Studies on constituents of fruit body of Polyporus umbellatus and their cytotoxic activity.Chem.Pharm.Bull,1992,40(1):143-147.
[27] Inaoka.Y,et al.Studies on active substances in herbs used for hair treatmem.I Effects of herb extracts on hair growth and isolation of an active substance from Polyporus umbellatus F.Chem.Pharm.Bull. 1994,42(3):530-533.
[28] Lu W,et al.Platelet aggregation potentiators from cho Rei. Chem. Pharm.Bull, 1985, 33(11): 5083-5087.
[29] Miyazaki T.Okiwa.N.Studies on fungal polysaccharide.Ⅶ water-soluble polysaccharide of Grifola umbellate (Pers.ex Fr) Pilat.Chem.Pharm.Bull, 1973,21 (11):2545.
[30] 吴东儒．糖类的生物化学．北京：高等教育出版社，1987．
[31] T.Qgawa and T.kaburaeh.ibid. 1982,103:53-64
[32] Y.Uneo et al. ibid. 1982,101:160-167
[33] 冯青然等．猪苓多糖分子量分布和特征粘数的测定．中药通报，1987，12(1)：38-40
[34] 朱勤，戴如琴等．猪苓发酵液多糖组分及摩尔比的测定．中药通报，1988，13(9)：32-33
[35] 沈文君等．猪苓、玉米须、黄芪、木通、淡竹叶的利尿作用．上海第一医学院学报，1957，38(1)
[36] 王利文，苏成业，刘国雄等．猪苓的利尿作用．药学学报，1964，11(12)：815-818
[37] 江苏新医学院．中药大辞典(下册)．北京：人民卫生出版社，1997：2191-2193
[38] 中医研究院中药研究所药理室、肿瘤组．猪苓的抗肿瘤作用研究．新医药学杂志，1979(2)：15-18
[39] 郑绳一．猪苓多糖治疗肿瘤研究阶段鉴定会．医药工业，1980(3)：45
[40] 张昌菊等．猪苓多糖抗肿瘤作用的机制研究．使用医学进修杂志·宜昌医学高专学报，1995，23(3)：150-152
[41] 沙静妹．猪苓多糖．药学通报，1985，20(2)：74-75
[42] 赵德来，谢锦玉．猪苓多糖和氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞的作用——细胞化学研究．解剖学报，1986，17(2)：186-189
[43] 张辉．猪苓多糖抗诱变性的研究．中成药，1993(1)：13-14
[44] 罗光．猪苓多糖(757)对体外培养细胞衰老过程中DNA含量影响的初步观察．老年医学专刊，1982，10(3)：94-97
[45] 张忠诚．改善艾滋病症状的猪苓制剂．国外医药·植物药分册，1996，11(2)：90
[46] 符慧娟，李永．猪苓汤临床新应用．吉林中医药，2003，23(9)：43
[47] 李世权．猪苓生态环境调查和野生变家种的初步研究．中药材科技，1980(3)：13-15
[48] 张言良，陈功夫等．猪苓人工栽培初报．陕西新医药，1978(2)：65-66
[49] 李式权等．猪苓人工栽培技术的研究．中药材科技，1981(4)：2-4
[50] 王学勇，汪洋，牟和等．水培法培育猪苓菌和．中药材科技，1982(3)：2-5
[51] 王淑芳等．猪苓菌核的组织分离及纯菌种的固体培养．微生物学通报，1978，5(4)：1-3
[52] 戴如琴，刘文巨，兰江丽．猪苓菌丝体的液体培养及其抗肿瘤作用的研究．新医药学杂志．1979(2)：19-22
[53] 王秋颖，徐锦堂．蜜环军发酵液在猪苓菌发酵过程中的应用．中国药学杂志，1993，28(8)：466
[54] 胡贵权．食用菌液体菌种的制作及应用．食用菌，1998，20(1)：17-18
[55] 俞俊棠，唐孝宣．生物工艺学(上册)．华东理工大学出版社：84
[56] 陈五岭等．He-Ne激光幅照红霉素链霉菌诱变育种的研究．光子学报，1998(6)：539-542
[57] 倪新立，丁立孝，潘迎捷等．姬松茸在两种培养基上生长期间九种胞外酶活性变化．菌物系统，2001，20(2)：222-227
[58] 刘斌，李政祥．香菇对木质纤维素的降解及其有关酶活的变化．广西农学院学报，1991，10(3)：57-62
[59] 李蕤，吴克，骆军等．金针姑固体培养几种胞外酶活力变化的研究．中国食用菌，2001，21(1)：12-14
[60] 何忠孝，张树政．生物化学实验技术丛书·电泳(第二版)．北京：科学出版社，1997：297
[61] 杨泽田等．分子生物学实验技术．西安：第四军医大学出版社，1988：427
[62] 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定．药学通报，1984，19(10)：46-49
[63] 夏尔宁，陈琼华．黑木耳多糖的分离、纯化、鉴定．生物化学及生物物理学胞，1988，20(6)：614-617
[64] 吴梧桐，余品华，夏尔宁等．银耳多糖TF-A、TF-B、TF-C的分离、纯化及组成单糖的鉴定．生物化学及生物物理学，1984，16(4)：393-398
[65] 武金霞，张贺迎，杨睿等．双孢蘑菇子实体多糖的提取及单糖组成．中国食用菌，2003，22(1)：31-33
[66] 李如亮．生物化学实验．武汉：武汉大学出版社，1998：14-16
[67] 张翼伸．多糖的结构测定．生物化学与生物物理学进展，1983，(5)：18-23
[68] 丁玉强，陈春英，Elmahadi.E.A等．箬叶水溶性多糖的色谱研究．色谱，1996，14(6)：470-472
[69] 孟宪纾．中成药分析(第二版)．北京：人民卫生出版社，1998：645
[70] 张承圭．生物化学仪器分析与技术．北京：高等教育出版社，1990
[71] 周与良，邢来君．真菌学．北京：高等教育出版社，1991：94-96
[72] 王玉万，王云．构菌栽培过程中对木质纤维素的讲解和几种多糖分解酶的活性变化．微生物学通报，1989，16(3)：137-140
[73] 顾芳红，殷红，马劲．碳、氮源对猪苓菌丝省长与胞外多糖含量的影响．西北大学学报，2001，31(5)：437-440
[74] 李兆兰，李学信．褶裂菌胞内多糖的分离、纯化、鉴定及性质．真菌学报，1994，13(4)：267-272
[75] 李兆兰．褶裂多糖的结构研究．南京大学学报，1994，30(3)：482-486
[76] Parker F S. Application of infrared, Raman and Resonance Raman Spectroscopy in BiOchemistry. America Aldrich Chemical Company INC, 1982: 132