摘要
背景:自然杀伤细胞(nature killer cell,NK细胞)是不同于T、B淋巴细胞的大颗粒淋巴细胞,无需抗原的预刺激即可发挥细胞毒效应。骨髓、肝脏、淋巴结、脾脏和肺脏等器官亦含有较多NK细胞。NK细胞识别受体与靶细胞接触,释放杀伤介质穿孔素和颗粒酶使靶细胞凋亡;还可以通过膜TNF家族分子与靶细胞配体结合诱导靶细胞凋亡。目前,对活化的NK细胞胞内信号传导过程知之甚少,研究表明NF-κB信号通路在促进活性物质的产生和NK的细胞毒活效应上发挥重要作用。BCL3是IκB家族非典型成员中的一员,通过与NF-κB的亚基P50和P52相互作用,在机体抵抗外来病原菌感染的免疫反应和抗肿瘤中发挥重要作用。BCL3通过调节细胞增殖和细胞凋亡发挥功能,但BCL3在NK细胞发育和发挥抗病毒活性过程中的作用还不是很清楚。目的:构建BCL3敲除鼠,鉴定得到BCL3-/-纯合子,并模拟体内肿瘤模型,观察在BCL3-/-中NK细胞的变化及体内肿瘤清除情况,并寻求BCL3和NK细胞之间的相互作用及分子机制。方法:通过CRISPR/Case9技术在BCL3基因的第二外显子处打靶,得到敲除鼠。通过尾静脉注射B16细胞和用CFSE标记的B2M小鼠脾脏细胞。H&E染色、流式细胞术检测B2M小鼠脾脏细胞在BCL3-/-和BCL3+/-中的清除情况。结果:获到BCL3-/-纯合子并能繁殖;BCL3-/-鼠体内NK数量减少,更易感染肿瘤,尾静脉注射B16细胞后,第10天观察到在BCL3+/-中肺部成瘤数要明显少于BCL3-/-肺部成瘤数。石蜡切片并H&E染色,BCL3-/-肺部可见实质瘤。流式细胞术检测,发现BCL3-/-鼠体内清除B2M细胞的能力要远远小于野生鼠(BCL3+/-)。结论:在BCL3-/-鼠体内,NK细胞数量减少,并且杀伤清除肿瘤功能减弱,但BCL3影响NK的机制还不是很清楚。
引文