牙鲆发育中ALP基因表达图式及功能分析

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• 出版年：2007
• 作者：陈晓武；施志仪；顾一峰
• 单位1：上海水产大学生物技术研究中心
• 出生年：1976
• 学历：博士
• 语种：中文
• 作者关键词：牙鲆；碱性磷酸酶；甲状腺素
• 起始页：894
• 总页数：5
• 经费资助：国家自然科学基金项目( 30271017)；高等教育博士项目科研基金(20040264001)；上海市重点学科建设项目(Y1101)资助
• 刊名：中国海洋大学学报（自然科学版）
• 是否内版：否
• 刊频：双月刊
• 创刊时间：1959
• 主管单位：中华人民共和国教育部
• 主办单位：中国海洋大学
• 主编：管华诗
• 地址：青岛市鱼山路5号
• 邮编：266003
• 卷：37
• 期：6
• 期刊索取号：P226.660 110-1

摘要

为探讨研究碱性磷酸酶(ALP)在牙鲆发育变态中的表达与功能，采用组织学和分子生物学的方法对牙鲆ALP进行了研究。结果如下：1．组织化学染色显示原肠期胚体中即可以检测到ALP的活性。出膜后，在头和背部的活性比较强，而身体的内脏区域，活性较低，卵黄中没有表现出酶活性。仔鱼进食后，ALP开始在消化道中大量的表达，特别是在胃肠道粘膜层。2．牙鲆ALP cDNA全长为1811bp，预测能编码476个氨基酸的蛋白质。采用RT-PCR的方法在牙鲆卵到出膜后5天的时候不能检测到ALP基因表达，到变态前的仔鱼体内开始表达。在成鱼胃、肝、鳃、皮肤、皮下肌肉、肾中均能检测到ALP的表达。3．变态前的仔鱼身体总ALP活力约为出膜时的卵中酶活力的4倍，在变态期酶活力变化不大，但是在变态后期上升明显。甲状腺素(T4)在变态中对酶活力增加有明显的促进作用。作为甲状腺素合成抑制剂，硫脲(TU)能降低仔鱼体内酶活性。4．使用ALP的活性抑制剂左旋咪唑(TRM)处理的仔鱼消化功能和头部骨骼的发育受到一定的影响。消化道内食物很少，消化道上皮层中ALP免疫显色反应减弱。头部骨骼中发现较多骨细胞死亡而只留下一些细胞碎片，超过95%的仔鱼不能完成右眼的移位就发生死亡，变态比对照组迟缓。5．定量PCR结果表明，变态中期ALP基因表达量只有初期的1/2，变态后期却明显上升到变态初期的2.5倍，T4和TU处理对ALP基因表达产生影响的在中期和后期表现明显。中期T4组明显高于对照组和TU组，变态后期T4组和TU组均低于对照组。