Zellulre Mikroskopie der Poly(ADP-Ribos)ylierung von Proteinen in Echtzeit

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• 作者：Annette Buntz ; Sarah Wallrodt ; Eva Gwosch ; Michael Schmalz ; Dr. Sascha Beneke ; Prof. Dr. Elisa Ferrando-May ; Prof. Dr. Andreas Marx and Prof. Dr. Andreas Zumbusch
• 刊名：Angewandte Chemie
• 出版年：2016
• 出版时间：September 5, 2016
• 年：2016
• 卷：128
• 期：37
• 页码：11423-11428
• 全文大小：2158K
• ISSN：1521-3757

文摘

Poly(ADP-Ribos)ylierung (PARylierung) ist eine wichtige posttranslationale Proteinmodifikation, die in grundlegende zelluläre Prozesse wie Genregulation und DNA-Reparatur involviert ist. Ihre Fehlregulierung wurde mit verschiedenen Krankheiten wie Krebs in Verbindung gebracht. Trotz größter Wichtigkeit gibt es nur wenige Methoden, um PARylierung und ihre Dynamik in Zellen zu beobachten. Mittels einer chemisch-biologischen Herangehensweise entwickelten wir ein fluoreszierendes NAD⁺-Analogon, das sich als kompetitiver Baustein für die PARylierung von Proteinen in vitro und in Zellen erwies. Dies ermöglichte uns, den Umsatz von PAR direkt und in lebenden Zellen nach DNA-Schädigung durch NIR-Mikrobestrahlung zu verfolgen. Zusätzlich wurden mithilfe von FLIM-FRET-Mikroskopie kovalente und nichtkovalente Interaktionen von PAR mit ausgewählten Proteinen sichtbar gemacht. Unsere Ergebnisse eröffnen neue Chancen für die schnelle zelluläre Untersuchung der Protein-PARylierung in Echtzeit und werden somit zu einem besseren Verständnis und höherer Aussagekraft im zellulären Kontext beitragen.