A型流感病毒H7N9株PB1和PB2基因的克隆和真核表达

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英文篇名：Cloning and Eukaryotic Expression of PB1 and PB2 Genes of Influenza A Virus H7N9 Strain 作者：薛宇佳 ; 杜江龙 ; 王晨 ; 万雪梅 ; 杨学财 ; 王峰 ; 贾骁晔 ; 冉乾东 ; 曹欣 英文作者：XUE Yu-jia;DU Jiang-long;WANG Chen;WAN Xue-mei;YANG Xue-cai;WANG Feng;JIA Xiao-ye;RAN Qian-dong;CAO Xin;College of Life Science and Engineering, Northwest Minzu University,Engineering; 关键词：A型流感病毒 ; PB1基因 ; PB2基因 ; 克隆 ; 真核表达 英文关键词：Influenza A virus;;PB1 gene;;PB2 gene;;Clone;;Eukaryotic expression 中文刊名：XNYX 英文刊名：Southwest China Journal of Agricultural Sciences 机构：西北民族大学榆中校区生命科学与工程学院; 出版日期：2019-06-28 出版单位：西南农业学报 年：2019 期：v.32 基金：西北民族大学研究生科研(实践)创新项目(Yxm201 8136);; Zbtb1基因调控小鼠造血干细胞向淋巴细胞分化的机制研究(17JR5RA277);; PLZF基因影响先天样T淋巴细胞胸腺滞留的功能和机制研究(31700763);; Zbtb1基因在T细胞发育过程中调控IL-7Rα表达的功能和机制研究(81760287) 语种：中文; 页：XNYX201906037 页数：4 CN：06 ISSN：51-1213/S 分类号：243-246

摘要

【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-Flag-PB1/PB2真核重组表达载体,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定PB1/PB2蛋白的表达。【结果】成功克隆了PB1和PB2全长基因,构建了A型H7N9流感病毒PB1和PB2蛋白真核表达载体pRK-Flag-PB1/PB2,并在293T细胞中转染表达,Western blot确定了PB1/PB2蛋白的成功表达。【结论】该表达载体的成功构建及在293T细胞中成功表达PB1和PB2蛋白,为后期开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用的研究奠定了基础。
        【Objective】This study aimed to construct the eukaryotic expression vector for non-structural proteins PB1 and PB2 of type A H7 N9 influenza virus and express the encoded protein in 293 T cells. 【Method】First, the total RNA of influenza virus type A H7 N9 isolated from Suzhou isolate was extracted, and the full-length genes of type A H7 N9 influenza virus PB1 and PB2 were obtained by RT-PCR technique, and then cloned into the eukaryotic expression vector pRK to construct pRK-Flag-PB1/PB2 eukaryotic recombinant expression vector was confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing. The validated plasmid was then transfected into 293 T cells, and the expression of PB1/PB2 protein was identified by Western blot. 【Result】The full-length genes of PB1 and PB2 were successfully cloned, and the pRK-Flag-PB1/PB2 eukaryotic expression vectors for PB1 and PB2 of type A H7 N9 influenza virus were constructed and transfected into 293 T cells. The result of Western blot confirmed successful expression of PB1/PB2 protein. 【Conclusion】The successful construction of the expression vector and successful expression of PB1 and PB2 proteins in 293 T cells laid the foundation for the later investigation of influenza virus protein function and interaction with proteins in eukaryotic cells.

引文

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