摘要
目的:探讨锰作用于SH-SY5Y细胞后引起神经细胞线粒体自噬的机制,为锰神经毒性防治选择新的靶点。方法:加入不同浓度(0、125、250、500、1000μmol/L)的MnCl_2,染毒24h后,MTT测定细胞存活率;Westernblot检测LC3、P62、beclin-1等自噬相关蛋白表达量,MDC染色法观察细胞自噬体的形成,及利用流式细胞术检测细胞膜电位变化情况,同时用激光共聚焦显微镜观察溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker Red)和线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)标记后的线粒体与溶酶体共定位情况。荧光酶标仪检测细胞内活性氧的浓度变化。结果:MDC染色法表明与对照组相比,处理组发生自噬体数量明显增多。LC3、beclin-1蛋白表达量在250μmol/L之前随染毒剂量的增加而增加与250μmol/L处达到最大之后逐渐减少(P<0.05)。FOX03与对照组相比,不同染毒浓度表达量均有上升。流式细胞术检测随着染毒浓度的增加,细胞膜电位逐渐降低。结论:MnCl_2可通过增加LC3、beclin-1的表达量促进SH-SY5Y细胞线粒体自噬发生,FOX03参与线粒体自噬过程。
引文