摘要
本文以瑞香狼毒(Setellera chamaejasme L)地上部分特别是瑞香狼毒叶为研究对象，对其次生代谢物质的抗肿瘤、抗菌活性进行了研究；对其生物活性物质的化学组成及其动态积累分布特征进行了研究。其目的在于揭示瑞香狼毒地上部分是否具有同类于其地下部分的药理药效成分，特别是抗肿瘤成分。为开发利用瑞香狼毒地上部分提供实验依据。
抗肿瘤活性研究结果表明：瑞香狼毒叶不同极性溶剂的提取物A、B、C对S_(180)的抑瘤效果分别是42.68％、42.56％、36.77％。说明三种提取物均有显著的抗肿瘤活性。
抗菌活性的研究结果表明：单体3在1／10000浓度时对大肠杆菌有明显的抑制作用。同时，相同浓度比较下，该单体对金黄色葡萄球菌的抑制作用大于对大肠杆菌的抑制作用。由以上的研究结果从次生代谢物质生物活性特征方面为瑞香狼毒地上部分的利用提供了可行性的依据。
通过提取、硅胶柱分离及UV、~1H-NMR、~(13)C-NMR、MS的鉴定技术，从瑞香狼毒叶中分离鉴定出两中具有抗肿瘤活性及其它重要生物活性的香豆素类化合物瑞香素和瑞香甙。
运用GC-MS手段对瑞香狼毒叶中5个组分进行了分离鉴定。结果表明有26种物质均为首次在该植物中发现。它们依次是：2-羟基-二甲基丙酸、4-甲基-1-庚烯-4-醇、5-甲基-3-乙醇、1-环戍基-1-丙醇、2，6，11-三甲基十二烷、2-丁基-1-辛醇、1-十八碳烯、3，7，11，15-四甲基-2-十六碳烯、龙脑、2-丙基-1-癸醇、二十碳烷、二十一碳烷、二十二碳烷、2，6，10，14-四甲基-2-十六碳烯、二十七碳烷、二十八碳烷、二十九碳烷、三十五碳烷、1-十九碳醇、油酸、二十五碳烷、二十四碳烷、9，12-十六碳二烯酸甲酯、9，12，15-十六碳三烯甲酯、苯丙噻唑。
对瑞香素的测定进行了高效液相色谱的方法学研究。确定应用HP-1050高效液相色谱仪测定瑞香素的色谱条件为：①色谱柱：Allteck
C18乃0…X牛石sin，stw柱；②流动相：甲醇：水斗O：60；③检测波长：
310urn；④柱温：28℃；⑤进样量：10ul。
对瑞香素标准品、样品的光谱纯度检测，光谱纯度因子均达到百分
之百。这一结果证明被分离的物质有极高的纯度，可做为标准品使用；
色谱条件及提取样品的方法正确，测试结果可靠。
瑞香狼毒地上植株不同部位瑞香素测定的结果为叶1厂6％、花
l．600、茎0．58O、根0．370。可见瑞香素在叶中的含量最高。地上部
分的含量远大于地下部分的含量。山此瑞香素的动态分布数量特征为
瑞香狼毒地上部分的开发利用提供了可行性的依据。
不同地区瑞香素测定的结果表明以叶含量为例道德苏木地区
1．760、科右前旗0．73O、长岭0．slO。可见不同地区瑞香狼毒药用品
质存在差异。就瑞香素而言，道德苏木地区瑞香狼毒地上部的药用品
质要好于其它两地。
The paper's study object is above part of Stellera chamaejasme L., especially its leaves. The study went on three aspects: antitumor and antibacterial activity, components of bioactive substances and their diversity and dynamic distribution.
The study result on the antitumor activity indicated: three different polar extracts of Stellera chamaejasme L.'s leaves-A, B and C had obvious antitumor activity. Their activities of inhibition on S-180 were 42.689%, 42.559% and 36.771%, separately.
The study on antibacterial activity showed the compound 3 inhibited the Escherichia coli obviously when the concentration is 1/10000. At the same time, the inhibition activity on Staphylococcus aureaus is stronger than that on Escherichia coli when the concentrations were same. Study on the secondary metabolites' bioactive activity provided basis for the exploitation of above part of Stellera chamaejasme L.
Through solvent-extraction, silica gel TLC and UV, 'H-NMR, 13C-NMR, MS, est., daphnetin and daphnin were separated and identified from Stellera chamaejasme L.'s leaves. They all had antitumor activity and others.
Five compounds were separated and identified by GC-MS from Stellera chamaejasme L.'s leaves. The result showed there were 26 components found in the plant for the first time. They were: 2-hydroxy-methyl Propanoic acid, 4-Methyl-1-hepten-4-1, 5-Methyl-3-Hexanol, 1-Cyclopentyl-1-propanol, 2,6,11-trimethyl-Dodecane, 2-Butyl-1-Octanol, 1-Octadecyne, 3,7,11,15-Tetramethyl-2-hexadecen-1-l, 2,4-dimethyl-3-Pentenal, borneel, 2-propyl-l-Heptanal, Heptacosane, Eicosane, Heneicosane, Docosane, Pentacosane, Octacosane, Nonadosane, Pentatriacontane, 2,6,10,14-tetramethyl-2-Hexadecene, Nonadecanol, oleic acid, 1-Tetracosanol, 9,12-Octadecadienoic acid methyl ester, Octadecatrinoicacid, Benzothiazole.
The means of HPLC, which identified the content of daphnetin, was studied carefully for its methodology. The condition of HP-1050 determining thedaphnetin was: chromatogram colum: Allteck C18(250mm +4.6mm, 5um); mobile phase: methanol : water-40:60; wavelength: 310nm; temperature: 28 C; injection quantity: 10ul. The sample's extraction condition: weighed l.000g crushed leaves of Stellera
chamaejasme L. exactly, then extracted it by ultrasound in 5ml 75% ethanol solution for 1.5 hour, filtrated and kept its volume in 10ml volumetric flask.
During the spectral purity identification on sample and standard sample, the check result of spectral purity factor was 100%. The result tested that the purity of identified compounds was normative, the method of pre-management was correct. So the conclusion about data was creditable.
The distribution of daphnetin's content in above part of Stellera chamaejasme L. was: 1.76% in leaves, 1.60% in flowers, 0.58% in stems, and 0.37% in roots. So we can conclude that daphnetin's content was highest in the leaves, and the content in above part of plant was more than that underground, daphnetin's dynamic distribution and diversity provided exploitation feasibility on the above part of Stellera chamaejasme L.
Take leaves as example, daphnetin's content was discrepant in different areas: 1.76% in Daode zone, 0.73% in Kerqin, and 0.81% in Changling. It indicated there existed difference on the Stellera chamaejasme L.'s medicine value in different areas. As far as daphnetin, Stellera chamaejasme L.'s medicine value coming from Daode was better than other areas.
引文
1 Ikegawa Tetsuo, Ikegawa Akiko. Chamaejasm in and eucham aejasm in extracted from Stellera chamaejasme and their antiviral activities[P]. 日本专利：08311056, 1995-05-19.
2 Tsybikova, D. Ts; Mochalove, Determination of microements in Sletter a Chamaejasme. Tekhaol Imst. I. A. Tv Vost-Sib. 1970, 3(3): 32-8.
3 Tsyblkova, E. B. Carbahydrntes from roots of stallera chaejasme Tv. Vost-sib. Tekhual Inst, 1970, 3(3): 22-8.
4 Tikhomirova L. I., Markova L. P., Tumbaa H. et al. Coumarins from Stellera chamaejasme [J]. Khim Prir Soedin. 1974, (3):402.
5 Niwa M, Takamizawa H., Tatematsu H., et al. Piscicidal constituents of Stellera chamaejasme L. [J]. Chem Pharm Bull, 1982, 30(12):4518.
6 Feng WJ, Zhang HL, Li, LF, et al. Studies on antitumor Chinese medicines. (Ⅱ). Antitumor constituents of Stellera chamaejasme L. [J]. Wakan Iyaku Gakkaishi, 1991, 8(2):96.
7 Feng WJ. Studies on antitumor active compounds of Stellera chamaejasme L. and their mechanism of action [J]. Toho Igokkai Zasshi, 1992, 38(6): 896.
8 Ikekawa T, Ikekawa N. Carcinestatic compounds and production there of[P]. PCT Int Appl WO 93, 03,039 (CI. C07D493/18), 1993-02-18.
9 Ikegawa T, Ikegawa A. Extraction of anticancer and antiviral substances from Stellera chamaejasme for therapeutic use[P]. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP08 92, 118[96 92, 118](CI. A61 K35/78), 1996-04-09.
10 Endo Yuichi, Maruno Masao, Miura Naoko, et al. Novel diterpenes and their use as antiviral and anti-HIV agents with toxicity [P].日本专利：10287617. 1998-10-27.药物分析杂志，2001，4：112-114
12 Jin CD, Ronald GM, Mohsen Daneshtalab. Phenylpropanoid glycosides from Stellera chamaejasme[J]. Phytochemistry, 1999, 50:677-680
13 刘桂芳，付玉芹，王连，等．瑞香狼毒化学成分研究[J]，中国中药杂志，1995，20(12)：216．
14 刘桂芳，赵瑞凌，付玉芹．瑞香狼毒化学成分研究[J]，中草药，1996，27(2)：67．
15 Tatematsu H, Kurokawa M, Niwa M, et al. Piscidal constituents of Stellera chamaejasme L. Ⅱ[J]. Chem Pharm Bull, 1984, 32(4): 1612.
16 Ikegawa T, Ikegawa A. Extraction of antitumor diterpenes from Stellera chamaejasme L[P]. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP 08 310, 993[93 310, 993](CI. C07 C69/21), 1996-04-26.
17 Xu Zhi-hong, Qin Guo-Wei, Li Xiao-Yu, Xu Ren-shang. NEW BIFLAVANONES AND BIOACTIVE COMP OUNDS FROM STELLERA CHAMAE ASML Acla Pharmaceutica Sinica 2001, 36(9):668-671.
18 谭仁祥主编．《植物成分分析》．科学出版社．
19 Rezanova, O. I; Bubeeve, L. I. Flawanoids from Stellerachamaejasme. Rastid Resar 1976, 12(3): 389-90.
20 黄魁文．瑞香狼毒中双二氢黄酮—狼毒素(Chamaejasmine)的分离鉴定．兰州大学学报(自然科学版)．1977，3(4)：50．
21 杨伟文，刑有权，宋茂森，等．7-甲氧基狼毒素的分离与结构测定[J]．高等学校化学学报，1984，(5)：671．
22 Liu GQ, Tatematsu H, Kurokawa M, et al. Novel C-3/C-3'-Bifiavanones from Stellera chamaejasme L[J]. Chem Pharm Bull, 1984, 32(2):362.
23 Niwa M, Tatematsu H, Liu GQ, et al. Isolation and structures of two new C-3/C-3' bifiavonones, neochamaejasmin A and neochamaejasmin B[J]. Chem Lett, 1984, (4):539.
24 Niwa M, Chen XF, Liu GQ, et al. Structure of isochamaejasmin from
Stellera chamaejasme L[J]. Chem Lett, 1984, (9):1587.
25 Niwa M, Otsuji S, Tatematsu H, et al. Stereostructures of two biflavanones from Stellera chamaejasme L[J]. Chem Pharm Bull, 1986, 34(8):3249.
26 Niwa M, Liu GQ, Tatematsu H, et al. Chamaechromone, a novel rearranged biflavonoid from Stellera chamaejasme L[J]. Tetrahedron Lett, 1984, 25(34):3735.
27 Ikegawa T, Ikegawa A. Chamaejasmin and euchamaejasmin extraction from Stellera chamaejasme and their antiviral activities [P]. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP 08 311, 056 [96 311, 056](CI. C07 D311/32), 1996-11-26.
28 Jin CD, Michetich RG, Daneshtalab M. Flavonoids from Stellera Chamaejasme [J]. Phytochemistry, 1999, 50(3):505.
29 冯宝民，裴月湖．瑞香狼毒中的黄酮类化合物[J]．中草药，2001，32(1)：14-15．
30 杨伟文，李兆林，杨玉成，等．瑞香狼毒化学成分研究(V)挥发油化学成分研究[J]．中药通报，1986，10(12)：31．
31 Modonova LD, Zhapova TS, Bulatova NV, et al. Coumarins from Stellera chamaejasme [J]. Khim Prir Soedin, 1985, (5):709.
32 Narantuyas S, Batsuren D, Rashkes Ya V, et al. Chemical study of plants of Mongolia: coumarins of Stellera chamaejasme structure of chamaejasmoside, a new bicoumarin glucoside[J]. Khim Prir Soedin, 1994, (2):738.
33 冯娜，魏春雁．瑞香狼毒叶挥发油研究．东北师范大学学报，2002，4：87-90．
34 于凤兰等．瑞香狼毒茎叶化学成分研究．
35 杨宝印，贾宝山，杨正裕，等．瑞香狼毒对小鼠移植性肿瘤的抑制作用[J]．中药通报，1986，(11)：186．
36 樊俊杰，贾正平，谢景文．瑞香狼毒水提物抗肿瘤作用[J]．内蒙古医学院学报，1996，18(2)：67．
37 樊俊杰，贾正平，谢景文．瑞香狼毒和狼毒素对体外培养小鼠白血病P388细胞生长的影响[J]．中药材，1996，10(11)：567-570．
38 冯威健，池川哲郎，吉田光二．瑞香狼毒提取物尼地吗啉的抗癌活性[J]．中花肿瘤杂志，1995，17(1)：24．
39 Ikegawa Tetsuo, Ikegawa Akiko. Extraction of antitumor deterpenes from Stellera chamaejasme [P].日本专利：08310993，1996-11-26．
40 Ikegawa Tetsuo, Ikegawa Akiko. Extraction of anticancer and antiviral substances from Stellera chamaejasme for therapeutic use[P].日本专利：0892118，1996-04-09．
41 杨永清．狼毒枣治疗结核疗效观察．中医杂志，1956，7：365．
42 张振声，郭成仕，狼毒剂对结核杆菌抗菌作用的观察报告．江苏中医，1966，(3)：31．
43 Endo Y, Maruno M, Miura N et al. Novel diterpenes and their use an antiviral and anti-HIV agents with low toxicity [P]. Jpn. Kkai Tokkyo Koho JP 10 287, 617 [98 287, 617](CI. C07 C69/21), 1998-10-27.
44 刘玉玺，王明正，孙美玲，等．狼母大戟碱性提取液治疗癫痫72例临床分析．中国中西医结合杂志，1994，14(5)：282-283．
45 胡垠玲．狼毒对免疫系统的作用．病毒学报，1990，(3)：224．
46 江苏新医学院．中药大辞典[M]．下册．上海：上海人民出版社，1977．
47 司在和．浅谈狼毒在皮肤病中的运用．吉林中医药，1989，(4)：36．
48 郭玉波．狼毒治疗牛皮癣250例．河北中医，1986，(4)：20．
49 陈冀胜等．《吉林省野生经济植物志》．科学出版社．1985，P250，338，502．
50 张国洲，王亚维，赵喜欢．瑞香狼毒提取物对亚洲玉米螟的生物活性研究．湖北农学院学报，1999，11：335-336．
51 张国洲，徐汉虹，吴振廷．瑞香狼毒提取物对菜粉蝶幼虫的拒食作用．安徽农业科学，2000，28(4)：464-465．
52 张国洲，吴恭谦．瑞香狼毒跟提取物防治菜粉蝶试验．农药科学与管理，2000，21(6)：29-31．
53 杨利民，刘敏莉．吉林西部草原三种优势有毒植物及其利用探讨．中国野生植物资源，1994，22-23．
54 邢福，王正文．科尔沁草地有毒植物及保证家畜安全的对策．草业学报，2000a，9(3)：66-73．
55 邢福，刘卫国，王成伟．中国草地有毒植物研究进展．中国草地，2000b，23(5)：56-61．
56 周淑清，黄祖杰，阿荣．狼毒异株克生现象的初步研究．中国草地，1998，4：52-55．
57 周淑清，侯天爵，黄祖杰．狼毒水浸液对几种主要牧草种子发芽的影响．中国草地，1993，4：77-79．
58 郭郁频，任永霞，吕进英，王昆，刘贵河．河北坝上地区天然草地主要有害植物及其开发利用．中国草地，1999，(1)：41-45．
59 陆元彪等．海北藏族自治州草原毒草棘豆狼毒调查报告．四川草原，1995，(4)：29-31．
60 刘洪先，汤宗孝．四川西部天然草地的有毒有害植物．中国草地，1986，1：51-55．
61 万国栋，胡阀成，周顺成．武威地区天然草地有毒植物及其防除．草地科学，1996，13(1)：4-7．
62 史志诚，杨旭．草地毒草危害及防除研究概论．草业科学，1994，11(3)：52-54．
63 史志诚．中国草地重要有毒植物．北京：中国农业出版社，1997，140-150．
64 邢福．东北退化草原狼毒种群生活史对策研究，东北师范大学博士学位论文．2002，4 P22．
65 万冬梅．大鸨繁殖期栖息地选择与濒危机制的研究．东北师范大学博士学位论文．2002，4 P29．
66 盛岩．松嫩平原碱化草甸演替系列群落羊群种群特征的比较研究．东北师范大学硕士学位论文．2002，5，P5．
67 姚新生等．《有机化合物光谱分析》．人民名卫生出版社，1983．
68 陈耀祖．《有机分析》．高等教育出版社，1981．
69 陈德昌．《碳谱及其在中药化学中的应用》．人民卫生出版社，1991．
70 龚运维．《天然药物化学的~(13)C核磁共振化学位移》．云南科技出版社，1986．
71 易大年．《核磁共振波谱在药物分析中的应用》．上海科技出版社，1985．
72 郑靖，石森林．瑞香素的药理研究进展．
73 冀春茹．长白瑞香的化学成分．植物学报，1994，11(3)：48-49．
74 Gregory J.Finn,Emmakenealy,Bevnadetts S.Greaven,Denise A. Egan~* In vitro cytotoxic potential and mechanison of action of selected coumarins, using heeman redal cell Lines cancer letter 183(2002)61-68.
75 杨振国，侯凤莲．光照对玉米苯丙安酸解氨酶活性的影响．吉林林学院学报，1997，13(3)：152-153