清热利湿中药治疗“癃闭”、“精浊”的实验研究及作用机制探讨
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摘要
目的：观察清热利湿中药复方制剂复方金钱草胶囊对慢性前列腺炎、良性前列腺增生的治疗作用并探讨其作用机制。
方法：(1)前列腺炎动物模型实验：分别采用25%消痔灵注入雄性大鼠前列腺背叶、1%角叉菜胶注入雄性大鼠前列腺腹叶分别诱导大鼠非细菌性慢性前列腺炎模型,3.0×108个/ml浓度金色葡萄球菌及大肠埃希菌混合菌液注入雄性大鼠前列腺腹叶诱导大鼠细菌性慢性前列腺炎模型,肉眼观察前列腺外观形态、计算前列腺指数、前列腺液中白细胞和卵磷脂小体数,光镜下观察前列腺组织的病理变化,ELISA方法检测血清中致炎细胞因子含量的变化。(2)前列腺增生动物模型实验：去势雄性大、小鼠皮下注射丙酸睾丸酮诱发前列腺组织增生。肉眼观察前列腺外观形态、计算前列腺指数、光镜下观察前列腺组织的病理变化,免疫组化染色法检测大鼠前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2、FAS的表达水平,TUNEL染色法检测大鼠前列腺细胞凋亡率,放射免疫法测定小鼠血清T、E2水平。(3)大鼠膀胱内压实验测定膀胱内压变化值、膀胱内压增幅抑制率。小鼠耳廓微循环实验测定耳廓微循环细动脉(A)、细静脉(V)的血流速度、血管口径,毛细血管开放量。小鼠凝血时间实验测定凝血时间。小鼠耳肿胀实验测定炎性肿胀度并计算肿胀度抑制率。小鼠棉球肉芽肿法测肉芽肿重量并计算肿胀度抑制率。小鼠热板法测定痛阈值。小鼠扭体实验测定扭体次数并计算镇痛抑制率。
结果：(1)前列腺炎动物模型实验：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对消痔灵所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用。可维持前列腺正常外观形态、降低前列腺指数、减少前列腺组织中白细胞数、增加前列腺组织中卵磷脂小体数、抗慢性炎细胞浸润、抗纤维化,有助前列腺分泌功能的恢复。其作用机制与抑制sICAM-1的合成与表达、减少MCP-1的分泌、抑制致炎细胞因子IL-1p、IL-6、TNF-α、IL-2诱导的慢性增生性炎症有关。对角叉菜胶所致大鼠慢性前列腺炎模型明显的保护作用。可维持前列腺正常外观形态、降低前列腺指数、减轻前列腺水肿及炎细胞浸润,减轻腺体变性坏死程度,其无菌性炎症反应程度低于模型对照组。对细菌所致大鼠慢性前列腺炎模型有抗炎细胞浸润、抗纤维化、减轻前列腺炎症反应程度的作用。(2)前列腺增生动物模型实验：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对丙酸睾酮所致大、小鼠前列腺增生模型有明显的保护作用。可减小前列腺体积、降低前列腺指数、维持前列腺组织正常形态、改善腺上皮增生程度、平滑肌增生及间质充血、水肿程度。其作用机制与抑制前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2表达水平,增强前列腺组织中FAS表达水平及提高细胞凋亡率有关,与血清中T、E2水平变化无关。(3)复方金钱草胶囊在所试剂量范围内可降低大鼠膀胱内压、改善小鼠耳廓微循环、延长小鼠凝血时间、减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀度及提高肿胀度抑制率、减少小鼠扭体反应次数及提高镇痛抑制率。
结论：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对消痔灵所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用,其作用机制与降低sICAM-1的合成与表达、减少MCP-1的分泌、抑制致炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2诱导的慢性增生性炎症有关；对角叉菜胶、混合菌所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用,可减轻前列腺炎症反应；对丙酸睾酮所致大、小鼠前列腺增生模型有明显的保护作用,其作用机制与抑制前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2表达水平、增强前列腺组织中FAS表达水平及提高细胞凋亡率有关；可降低大鼠膀胱内压促进排尿、改善微循环、减轻化学致炎物质导致的组织水肿及外周性疼痛。
Objective:To study on the therapeutic effect and the mechanism of the FFJQC capsule on CP and BPH.
Method:(1) experimental animal model of prostatitis:respectively inject25%Xiaozhiling Injection into male rat prostate dorsal lobe and1%carrageenan into the male rat prostate ventral lobe to induce non-bacterial CP rats model.3.0×108/ml of Staphylococcus aureus and Escherichia coli mixed bacteria injected into the male rat prostate ventral lobe to induce in chronic bacterial prostatitis model, then observe the morphology of prostate, calculate the prostatic index, Leukocytes and lecithin corpuscles in pretherapy, observing the pathological changes of the prostate tissue with Light, detect serum proinflammatory cytokine levels with the ELISA.(2) experimental animal model of prostatic hyperplasia:castrated male mice were injected subcutaneously with testosterone propionate-induced proliferation of prostate tissue. Visual observation of prostate morphology, the calculation of prostate index,under the light microscope to observe the pathological changes of the prostate tissue, PCNA, VEGF, FGF-2and the level of FAS expression, TUNEL staining detection by immunohistochemical staining in rat prostate tissue of rat prostate cells apoptosis rate, measured T and E2concentration in serum by radioimmunoassay.(3) other pharmacodynamics:experimental determination of the internal pressure in the rat bladder intravesical pressure changes and in the value of growth inhibition rate of bladder pressure. Micro circulation in mice experimentally determined microcirculation arterioles (A), thin vein blood flow velocity (V), vascular caliber, open capillaries. Clotting time experimental determination of the clotting time. The mouse ear swelling test can determine the inflammatory swelling and calculate the inhibition rate of swelling. Granuloma in mice measured granuloma weight and calculate the swelling suppression rate. Mouse hot plate method for the determination of the pain threshold. The experimental determination of writhing and calculate the analgesia inhibitory rate.
Results:(1) experimental animal model of prostatitis:FFJQC capsule in the reagent volume within the spirit of extinction mole rats induced by chronic prostatitis model has a significant protective effect. It can maintain normal prostate morphology, reduce prostatic index, decrease the number of leukocytes in the prostate tissue, increase the number of lecithin in the prostate tissue, anti-chronic inflammatory cell infiltration, anti-fibrosis, and helping the recovery of the prostate secretory function. Its mechanism of action associated with the lower levels of sICAM-1synthesis and expression, reduce the secretion of MCP-1, inhibition of pro inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF-alpha, IL-2induced chronic proliferative inflammation. Rat model of chronic prostatitis caused by carrageenan has a significant protective effect. It can maintain normal prostate morphology, reduce prostate index, reduce prostate edema and inflammatory cell infiltration, reduce the gland degeneration and necrosis, aseptic inflammatory reaction lower than the model control group. Chronic prostatitis model in rats caused by bacteria has reduced the role of the degree of response of prostatitis.(2) experimental animal model of prostatic hyperplasia:FFJQC capsule in the reagent volume due to the model of mouse prostatic hyperplasia caused by testosterone propionate has a significant protective effect. It can reduce the volume of the prostate and reduce prostate index, maintain the normal shape of the prostate tissue, improve the degree of proliferation of glandular epithelium, smooth muscle hyperplasia, and the interstitial congestion, edema. Its mechanism of action associates with suppressing the expression of PCNA, VEGF,FGF-2and increasing the expression of FAS,apoptosis rates in the prostate tissue,but has nothing to do with the T, E2levels in serum.(3)other pharmaco dynamics:FFJQC capsule in the scope of the reagent volume can reduce the internal pressure of the rat bladder, improve the mouse's auricle circulation, prolonged clotting time, reduce the xylene-induced mouse ear swelling and swelling degree of inhibition rate, reduce the number of writhing response in mice and improve analgesic suppression rate.
Conclusion:FFJQC capsule in the reagent volume within the spirit of extinction mole rats induced by chronic prostatitis has a significant protective effect, its mechanism of action associated with the lower level of sICAM-1synthesis and expression, reduce the secretion of MCP-1, inhibition of pro inflammatory cytokines IL-1β IL-6, TNF-alpha, IL-2induced chronic proliferative inflammation-related; It has a significant protective effect on rat model of chronic prostatitis caused by carrageenan, mixed bacteria,it can reduce prostate inflammation reaction; the rats and mice model of prostate hyperplasia caused by testosterone propionate have a significant protective effect, and its mechanism associated with the lower level of PCNA, VEGF and the expression of FGF-2in the prostate tissue, increased expression of FAS in prostate tissue and cell apoptosis rates; It can reduce the internal pressure in the rat bladder and promote urination, improve micro circulation, reduce edema and peripheral pain caused by inflammatory substances.
方法：(1)前列腺炎动物模型实验：分别采用25%消痔灵注入雄性大鼠前列腺背叶、1%角叉菜胶注入雄性大鼠前列腺腹叶分别诱导大鼠非细菌性慢性前列腺炎模型,3.0×108个/ml浓度金色葡萄球菌及大肠埃希菌混合菌液注入雄性大鼠前列腺腹叶诱导大鼠细菌性慢性前列腺炎模型,肉眼观察前列腺外观形态、计算前列腺指数、前列腺液中白细胞和卵磷脂小体数,光镜下观察前列腺组织的病理变化,ELISA方法检测血清中致炎细胞因子含量的变化。(2)前列腺增生动物模型实验：去势雄性大、小鼠皮下注射丙酸睾丸酮诱发前列腺组织增生。肉眼观察前列腺外观形态、计算前列腺指数、光镜下观察前列腺组织的病理变化,免疫组化染色法检测大鼠前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2、FAS的表达水平,TUNEL染色法检测大鼠前列腺细胞凋亡率,放射免疫法测定小鼠血清T、E2水平。(3)大鼠膀胱内压实验测定膀胱内压变化值、膀胱内压增幅抑制率。小鼠耳廓微循环实验测定耳廓微循环细动脉(A)、细静脉(V)的血流速度、血管口径,毛细血管开放量。小鼠凝血时间实验测定凝血时间。小鼠耳肿胀实验测定炎性肿胀度并计算肿胀度抑制率。小鼠棉球肉芽肿法测肉芽肿重量并计算肿胀度抑制率。小鼠热板法测定痛阈值。小鼠扭体实验测定扭体次数并计算镇痛抑制率。
结果：(1)前列腺炎动物模型实验：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对消痔灵所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用。可维持前列腺正常外观形态、降低前列腺指数、减少前列腺组织中白细胞数、增加前列腺组织中卵磷脂小体数、抗慢性炎细胞浸润、抗纤维化,有助前列腺分泌功能的恢复。其作用机制与抑制sICAM-1的合成与表达、减少MCP-1的分泌、抑制致炎细胞因子IL-1p、IL-6、TNF-α、IL-2诱导的慢性增生性炎症有关。对角叉菜胶所致大鼠慢性前列腺炎模型明显的保护作用。可维持前列腺正常外观形态、降低前列腺指数、减轻前列腺水肿及炎细胞浸润,减轻腺体变性坏死程度,其无菌性炎症反应程度低于模型对照组。对细菌所致大鼠慢性前列腺炎模型有抗炎细胞浸润、抗纤维化、减轻前列腺炎症反应程度的作用。(2)前列腺增生动物模型实验：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对丙酸睾酮所致大、小鼠前列腺增生模型有明显的保护作用。可减小前列腺体积、降低前列腺指数、维持前列腺组织正常形态、改善腺上皮增生程度、平滑肌增生及间质充血、水肿程度。其作用机制与抑制前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2表达水平,增强前列腺组织中FAS表达水平及提高细胞凋亡率有关,与血清中T、E2水平变化无关。(3)复方金钱草胶囊在所试剂量范围内可降低大鼠膀胱内压、改善小鼠耳廓微循环、延长小鼠凝血时间、减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀度及提高肿胀度抑制率、减少小鼠扭体反应次数及提高镇痛抑制率。
结论：复方金钱草胶囊在所试剂量范围内对消痔灵所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用,其作用机制与降低sICAM-1的合成与表达、减少MCP-1的分泌、抑制致炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2诱导的慢性增生性炎症有关；对角叉菜胶、混合菌所致大鼠慢性前列腺炎模型有明显的保护作用,可减轻前列腺炎症反应；对丙酸睾酮所致大、小鼠前列腺增生模型有明显的保护作用,其作用机制与抑制前列腺组织中PCNA、VEGF、FGF-2表达水平、增强前列腺组织中FAS表达水平及提高细胞凋亡率有关；可降低大鼠膀胱内压促进排尿、改善微循环、减轻化学致炎物质导致的组织水肿及外周性疼痛。
Objective:To study on the therapeutic effect and the mechanism of the FFJQC capsule on CP and BPH.
Method:(1) experimental animal model of prostatitis:respectively inject25%Xiaozhiling Injection into male rat prostate dorsal lobe and1%carrageenan into the male rat prostate ventral lobe to induce non-bacterial CP rats model.3.0×108/ml of Staphylococcus aureus and Escherichia coli mixed bacteria injected into the male rat prostate ventral lobe to induce in chronic bacterial prostatitis model, then observe the morphology of prostate, calculate the prostatic index, Leukocytes and lecithin corpuscles in pretherapy, observing the pathological changes of the prostate tissue with Light, detect serum proinflammatory cytokine levels with the ELISA.(2) experimental animal model of prostatic hyperplasia:castrated male mice were injected subcutaneously with testosterone propionate-induced proliferation of prostate tissue. Visual observation of prostate morphology, the calculation of prostate index,under the light microscope to observe the pathological changes of the prostate tissue, PCNA, VEGF, FGF-2and the level of FAS expression, TUNEL staining detection by immunohistochemical staining in rat prostate tissue of rat prostate cells apoptosis rate, measured T and E2concentration in serum by radioimmunoassay.(3) other pharmacodynamics:experimental determination of the internal pressure in the rat bladder intravesical pressure changes and in the value of growth inhibition rate of bladder pressure. Micro circulation in mice experimentally determined microcirculation arterioles (A), thin vein blood flow velocity (V), vascular caliber, open capillaries. Clotting time experimental determination of the clotting time. The mouse ear swelling test can determine the inflammatory swelling and calculate the inhibition rate of swelling. Granuloma in mice measured granuloma weight and calculate the swelling suppression rate. Mouse hot plate method for the determination of the pain threshold. The experimental determination of writhing and calculate the analgesia inhibitory rate.
Results:(1) experimental animal model of prostatitis:FFJQC capsule in the reagent volume within the spirit of extinction mole rats induced by chronic prostatitis model has a significant protective effect. It can maintain normal prostate morphology, reduce prostatic index, decrease the number of leukocytes in the prostate tissue, increase the number of lecithin in the prostate tissue, anti-chronic inflammatory cell infiltration, anti-fibrosis, and helping the recovery of the prostate secretory function. Its mechanism of action associated with the lower levels of sICAM-1synthesis and expression, reduce the secretion of MCP-1, inhibition of pro inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF-alpha, IL-2induced chronic proliferative inflammation. Rat model of chronic prostatitis caused by carrageenan has a significant protective effect. It can maintain normal prostate morphology, reduce prostate index, reduce prostate edema and inflammatory cell infiltration, reduce the gland degeneration and necrosis, aseptic inflammatory reaction lower than the model control group. Chronic prostatitis model in rats caused by bacteria has reduced the role of the degree of response of prostatitis.(2) experimental animal model of prostatic hyperplasia:FFJQC capsule in the reagent volume due to the model of mouse prostatic hyperplasia caused by testosterone propionate has a significant protective effect. It can reduce the volume of the prostate and reduce prostate index, maintain the normal shape of the prostate tissue, improve the degree of proliferation of glandular epithelium, smooth muscle hyperplasia, and the interstitial congestion, edema. Its mechanism of action associates with suppressing the expression of PCNA, VEGF,FGF-2and increasing the expression of FAS,apoptosis rates in the prostate tissue,but has nothing to do with the T, E2levels in serum.(3)other pharmaco dynamics:FFJQC capsule in the scope of the reagent volume can reduce the internal pressure of the rat bladder, improve the mouse's auricle circulation, prolonged clotting time, reduce the xylene-induced mouse ear swelling and swelling degree of inhibition rate, reduce the number of writhing response in mice and improve analgesic suppression rate.
Conclusion:FFJQC capsule in the reagent volume within the spirit of extinction mole rats induced by chronic prostatitis has a significant protective effect, its mechanism of action associated with the lower level of sICAM-1synthesis and expression, reduce the secretion of MCP-1, inhibition of pro inflammatory cytokines IL-1β IL-6, TNF-alpha, IL-2induced chronic proliferative inflammation-related; It has a significant protective effect on rat model of chronic prostatitis caused by carrageenan, mixed bacteria,it can reduce prostate inflammation reaction; the rats and mice model of prostate hyperplasia caused by testosterone propionate have a significant protective effect, and its mechanism associated with the lower level of PCNA, VEGF and the expression of FGF-2in the prostate tissue, increased expression of FAS in prostate tissue and cell apoptosis rates; It can reduce the internal pressure in the rat bladder and promote urination, improve micro circulation, reduce edema and peripheral pain caused by inflammatory substances.
引文
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